神经干细胞移植及人参川芎嗪注射液干预对脑梗死大鼠BDNF蛋白表达的影响
神经细胞,1材料与方法,2结果,3讨论
,随着我国生活水平的升高,而忽略了科学的生活习惯,是导致我国现阶段脑梗死发病率逐年升高的最主要的原因。脑梗死的高致残率严重影响了人类的生活质量,而以我国的形势最为严峻[1]。虽然溶栓治疗对部分急性脑梗死病人的康复有明显效果,但因有时效限制,且有诱发脑出血潜在危险,故无法惠及所有病人[2],目前种类繁多的神经保护药物临床应用疗效欠佳[3]。因此脑梗死的有效治疗仍是现阶段研究的重点。
脑梗死发生后神经细胞因缺血导致损伤或凋亡,损伤的神经细胞膜通透性增加,炎性细胞聚集,有害的细胞因子表达升高,神经细胞自我修复能力下降[4]。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)有强大的增殖能力,并能分化成为神经元和神经胶质细胞,且来源广泛[5],Li 等[6]研究显示,神经干细胞移植可观察到脑梗死动物模型有新生的神经细胞。神经干细胞被认为是对神经系统疾病有确切疗效作用的最佳干细胞[7-8]。
人参川芎嗪注射液有效成分为人参、川芎嗪,两者联合可达到益气活血之疗效,有研究显示,人参川芎嗪注射液可以正面干预大鼠缺血性脑梗死[9]。本研究通过人参川芎嗪注射液联合神经干细胞移植对大鼠脑梗死模型的干预,检测NSCs的迁移情况,观察神经功能的变化,检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因以及BDNF蛋白的表达水平,来综合评价其治疗效果。
1 材料与方法
1.1 实验动物 纯系成年清洁SD大鼠60只,2月~3月龄,体重170 g~220 g,孕14 d~16 d的SD大鼠2只,均购于河北医学科学院动物实验室,动物质量合格证号:SCXK(冀)20140009。饲养温度20 ℃~25 ℃,相对湿度(57±3)%,正常饲养,以动物伦理学标准在实验中对动物进行处置。
1.2 主要试剂及设备 人参川芎嗪注射液,天洋(安徽)药业生产;IMDM、BrdU、BrdU一抗、Brdu二抗,购自美国Bachem公司;Trizol试剂盒,购自Cytoskeleton公司;逆转录试剂盒、羊抗兔二抗,购自海泰克生物技术有限公司;引物序列,购自成都法玛基因科技有限公司;紫外透射仪,购自美国UVP公司;荧光显微镜,购自上海研润光机科技有限公司;PVDF膜,购自美国Santa cruz公司;ECL试剂盒,购自福建博特生物科技有限公司。
1.3 方法
1.3.1 NSCs的分离培养 取孕14 d~16 d的SD大鼠1只,10 g/L巴比妥钠注射液以35 mg/kg的剂量进行腹腔注射 ......
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