止颤汤对帕金森病异动症大鼠DARPP-32磷酸化表达的影响
纹状体,左旋多巴,1材料与方法,2结果,3讨论
,帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是目前中老年的一种多发病,已成为继阿尔海默茨病之后影响老年人心身健康的第二大神经退行性功能障碍疾病[1]。目前PD的治疗仍以左旋多巴为主的替代治疗。但长期使用左旋多巴,会出现一些严重的并发症,其中最为突出的是异动症(LID),异动症是一种舞蹈样、手足徐动样或简单重复的不自主动作,很多中晚期病人因此致残[2]。
PD运动并发症是临床上的工作难点,目前未有临床上广泛推广的治疗药物及技术,主要以减量外源性多巴胺摄入为主,但这样可能加重PD 症状。故中医药治疗异动症是一个很好的切入点。止颤汤治疗异动症有很好的疗效,但其作用机制尚不明确。目前研究发现,纹状体黑质投射神经元内纹状体环磷酸腺苷(cAMP)依赖性蛋白激酶(PKA)通路和其下游信号转导蛋白多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)的蛋白Thr34位点磷酸化表达改变可能参与了异动症的发病[3-4]。故本课题拟采用中药止颤汤治疗异动症大鼠,观察大鼠异常不自主行为及纹状体DARPP-32(Thr34)磷酸化表达的影响,旨在探讨其治疗LID的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 成年雄性SD大鼠50只,体质量180 g~220 g,经反复行为检测确认无旋转行为。
1.2 药物配制 止颤汤为上海市中医医院名老中医李如奎教授经验方,中剂量药物:黄芪15 g,丹参9 g,钩藤18 g,知母12 g,白芍12 g,制大黄15 g,升麻9 g组成,水煎浓缩至每毫升含生药1.28 g。大、小剂量药物分别为在中剂量基础上增减20%,储存于冰箱备用。
1.3 方法
1.3.1 LID大鼠模型制备 利用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备PD模型大鼠[5],2周后进行行为学观察:按0.5 mg/kg腹腔注射阿扑吗啡,记录1 h内大鼠旋转总圈数,大于100圈即为PD模型制作成功。同时随机选取6只大鼠用生理盐水代替6-OHDA 注射作为正常组(假手术组)。将左旋多巴和苄丝肼溶于含0.2% 维生素C的消毒生理盐水中,使左旋多巴终浓度为10 mg/mL,苄丝肼为2.5 mg/mL。3周后对造模成功的PD大鼠腹腔注射左旋多巴甲酯(50 mg/kg)/苄丝肼(12.5 mg/kg)4周,每日两次(09:00与17:00),制备LID大鼠模型[6]。随机将LID模型分为:模型组、西药组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组,每组6只。模型组大鼠给予腹腔注射含0.2% 维生素C的消毒生理盐水 ......
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