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    近年来，有关离子通道与疾病相关报道日益增多。有研究表明，通道的分子结构或其中氨基酸位点的改变可能引发某种疾病；同时，某些药物或疾病可影响某种离子通道的功能和结构，导致机体产生一系列病理性改变[1]。随着心脏电生理技术的发展尤其是膜片钳技术在基础领域中的广泛应用，越来越多证据表明许多心血管疾病的发生与离子通道的功能和结构改变密切相关，但不同药物或疾病其影响通道或其亚型不同，因此，应用膜片钳技术对此方面的变化进行系统探索、指导临床合理用药具有重要意义。利用膜片钳技术对心脏疾病各方面实验探究中，心肌细胞已成为目前研究心肌代谢、病理生理、发病机制及心肌疾病治疗的重要工具[2]。膜片钳研究的首要条件是需要合格的心肌细胞。目前，心肌细胞的来源有机械分离法、组织块酶解法、原代细胞培养、急性分离法等方法。虽然常用的细胞多为培养细胞，但与急性分离细胞在形态和功能存在较大差异，急性分离细胞更接近人体的生理状态，实验结果更具说服力。在细胞分离过程中，许多不稳定因素导致分离得到的细胞在数量和质量方面未满足实验要求。本研究经过反复实验和分析后，总结可能存在的影响因素并加以改进，寻找一种操作简单快捷、重现性高的分离方法，进而获得用于膜片钳实验的高质量心肌细胞。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级SD大鼠，雌雄不限，体重为200 g～350 g，由扬州大学医学院实验动物中心提供。

    1.2 实验试剂 胶原酶Ⅱ购自Worthington公司，4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、葡萄糖(glucose)、牛磺酸(Taurine)购自美国Sigma公司，其余试剂均为国产分析纯。

    1.3 主要液体配制 无钙台氏液：NaCl 135 mmol/L；KCl 5.4 mmol/L；MgCl2·6H2O 1.0 mmol/L；Na2H2PO4·2H2O 0.3 mmol/L；glucose 10.0 mmol/L；HEPES 5.0 mmol/L。采用NaOH调整pH为7.35～7.40。台氏液：无钙台氏液中加入CaCl21.8 mmol/L。酶液：在无钙台氏液中加入胶原酶Ⅱ0.5 g/L，Taurine 0.4 g/L，牛血清白蛋白(BSA)1 g/L和CaCl230 μmol/L。细胞保存液(KB)：Taurine10.0 mmol/L；L-谷氨酸(L-glutamic acid)70.0 mmol/L；KCl 25.0 mmol/L；Na2H2PO4·2H2O 10.0 mmol/L；乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)0.5 mmol/L；HEPES 5.0 mmol/L；glucose 11.0 mmol/L；KOH 89.1 mmol/L ......