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编号:222140
头针透刺法对急性脑梗死大鼠CD40与CD40L信号通路的影响
http://www.100md.com 2018年7月27日 中西医结合心脑血管病杂志 2018年第11期
亚组,脑组织,1材料与方法,2结果,3讨论
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    随着我国居民生活水平不断提高,脑梗死发病率呈现增长趋势,已连续5年成为第二位的死亡原因,且具有极高的致死率、致残率及复发率[1]。急性脑梗死(ACI)是临床常见的神经系统疾病,对人类的生命健康及生存质量造成严重威胁。大量研究表明,脑血管病经抢救存活者,大部分留有不同程度的致残性后遗症,如半身不遂、构音障碍、智力减退等,严重影响病人回归家庭、工作和社会,带来经济和精神的双重压力[2]。目前临床治疗急性脑梗死的主要手段为溶栓,其目的是恢复病变组织的血流及挽救缺血半暗带的血供,但其存在严格的窗口期,在临床受到一定的限制[3]。随着头皮针治疗脑血管病研究的快速发展,早期或超早期针灸治疗急性脑梗死已成为针灸界研究方向。本研究根据头穴的归经与主治,以百会透前顶、率谷透悬厘,并手指捻针为治疗方法,观察神经功能缺损情况、CD40与CD40L表达量与凋亡关系,探讨头针透刺法对脑组织神经细胞的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组 雄性健康Wistar大鼠[湖北省实验动物研究中心,合格证号:SCXK(鄂)2008- 0005]60只,体重200 g±20 g。所有大鼠均在实验室常规饲养适应1周,采用随机数字表分为头针透刺组、模型对照组和假手术组,各组又分为7 d和14 d两个亚组,每个亚组10只大鼠,用苦味酸标记并编号。

    1.2 实验主要试剂与仪器 华佗牌无菌针灸针(规格:0.20 mm×25 mm,标准号:GB2024- 1994,苏州医疗用品厂有限公司),酶联免疫吸附法测定(ELISA)试剂盒(美国R&D System公司提供,晶美生物工程有限公司);浓缩型兔抗人CD40与CD40L单克隆抗体(一抗)、酶标抗鼠/兔聚合物(二抗,购自上海雅吉生物科技有限公司);即用型免疫组化Elivision TM plus试剂盒、DAB显色试剂盒及磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS;购自上海一研生物科技有限公司),sCD40L浓度单位为ng/mL,灵敏度0.156。一端经过石蜡制备后的钓鱼线(长度为15 mm)。低速控温离心机(上海赵迪离心机设备有限公司),医用低温电冰箱、水浴箱、酶标仪、切片机(德国ZEISS公司)、光学显微镜(美国)。

    1.3 模型制备 参照改良Zea Longa法制备一侧大脑中动脉阻塞(MCAO)动物模型[4]。术前准备及手术步骤:术前禁食不禁水12 h,随后称重计数。用10%水合氯醛腹腔麻醉(0.35 mL/kg) ......

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