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    由于各种心脏疾病及其他基础疾病的影响，心脏心室充盈及射血能力受到损伤引起慢性充血性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)的发生和发展。CHF病程长且进行性加重，其进展具有不可逆性，发病率和死亡率逐年增加，是国内外学者研究的重点。近年来大量研究开始关注心肌细胞能量代谢调节在CHF中的作用[1]。在心力衰竭过程中，心肌细胞能量代谢与心力衰竭进展密切相关，心肌细胞能量合成可以保持心脏基本物质代谢的稳定，从而维持心脏功能并满足机体各个脏器代谢需要。由于脂肪酸和糖类的代谢失衡，造成心肌细胞内能量代谢方式的变化，从而引起心肌内部结构损伤功能障碍。因此，调节心肌细胞能量代谢方式可成为治疗心力衰竭的新方法。

    在常氧条件下，心脏中>95%的三磷酸腺苷(ATP)来自线粒体的氧化磷酸化。余下的5%主要来自糖酵解，较少部分来自三羧酸循环[2]。糖酵解过程发生在细胞基质中，产生的乳酸释放H+到细胞外，本实验通过检测胞外H+释放速率(extracellular acidification rate，ECAR)了解糖酵解的活跃程度。线粒体有氧呼吸发生在线粒体内膜上，特点是消耗氧气，因此线粒体有氧呼吸越旺盛表明线粒体功能越旺盛。本实验通过检测氧气消耗速率(oxygen consumption rate，OCR)，了解线粒体有氧呼吸功能。细胞能量代谢检测系统利用检测O2压力和pH值，定量反映了无氧酵解和有氧氧化的过程。本实验拟以H9c2心肌细胞为研究对象，利用细胞能量代谢检测系统检测其无氧酵解和有氧氧化参数，为后期检测中药参附益心颗粒对缺氧心肌细胞能量代谢的研究提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞系 大鼠H9c2心肌细胞株：中国科学院上海细胞库。

    1.2 主要试剂和材料 DMEM培养基购自Gibco公司；胰蛋白酶购自Solarbio公司；胎牛血清购自BI公司；Seahorse XF培养基、Seahorse XF水化液、水化板、培养板、糖酵解压力测试实验试剂盒、线粒体有氧氧化压力测试实验试剂盒购自美国SEAHORSE公司；葡萄糖、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠购自SIGMA公司，NaOH及其他试剂为国产分析纯。

    1.3 仪器 日本Olympus CK-40倒置显微镜，苏州安泰BCM-1300生物洁净工作台，美国Milli-Q超纯水仪，美国Seahorse XF24孔细胞能量代谢检测系统。

    1.4 方法

    1.4.1 细胞培养及传代 大鼠H9c2细胞株在含有10%胎牛血清的DMEM完全培养基、37 ℃ ......