， ，保和，1 材料与方法

    1.1 实验材料 96孔白板、96孔黑板、20 μL枪头、200 μL枪头、1 mL枪头、5 mL枪头、加样槽、试管架、棉球、酒精灯、移液器、50 mL离心管。

    1.2 实验试剂 磷酸缓冲盐溶液(PBS)、平衡盐溶液、双抗(PS)、血清(FBS)、DMEM/F12培养基(Gibcal)、过氧化氢(H2O2)、Cell Counting Kit-8(日本同仁)、Mito Tracker4?Deep Red(Invitrogen，Eugene，USA，22624)、Hoechst33342(Invitrogen，Eugene，USA，H1399)、FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I(BD Pharmingen，556547)

    1.3 实验仪器 FlexStation 3(MD，美国)，高内涵仪器(PE，美国)，Opretta system。

    1.4 实验方法

    1.4.1 细胞培养 将提取成功且纯度达90%的原代乳鼠心肌细胞接种于96孔白色培养板和96孔黑色培养板，接种细胞密度为3×104个/孔，每孔加入含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基100 μL，置于CO2孵箱正常培养72 h后用于实验。

    1.4.2 分组及造模 将H2O2原液用PBS配制成10 μmol/L的母液，再用DMEM/F12 培养基将母液配制成不同浓度溶液并加入白色细胞培养板，每孔100 μL。浓度分组，A组：DMEM/F12(control)；B组：100 μmol/L；C组：200 μmol/L；D组：300 μmol/L；E组：400 μmol/L；F组：500 μmol/L；G组：600 μmol/L；H组：700 μmol/L；I组：800 μmol/L；J组：1 000 μmol/L；每组4个复孔 ......