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    缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain injury，HIBI)是新生儿死亡和神经功能缺损的常见原因[1-2]。0.1%～0.2%新生儿出现围生期窒息引起HIBI，约20%死亡，高达40%幸存者出现脑性麻痹、智力障碍或癫痫等[3]。已有研究证实，多种复杂病理事件，如细胞凋亡、炎症、氧化应激和缺氧缺血脑损伤后兴奋性毒性等均导致神经元死亡并引发神经功能障碍[4-5]，细胞凋亡是HIBI神经细胞死亡的主要形式[6]。因此对凋亡发生机制及抗凋亡药物研究成为目前研究HIBI治疗的新方法。丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate，EP)是丙酮酸酯的稳定亲脂性酯衍生物，具有抗氧化和清除自由基能力。已有研究提出EP通过多种机制，如炎症反应抑制、自由基清除、抗神经元凋亡等参与对HIBI神经损伤的保护作用，然而其保护作用所涉及相关机制及具体分子靶标有待阐明。本研究通过建立新生大鼠HIBI模型，探讨EP对HIBI新生大鼠海马神经元凋亡的影响，并探讨可能机制，以期为HIBI治疗提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 昆明动物研究所提供新生7 d龄Wistar大鼠幼仔105只，体重(13.6±1.7)g，雌雄比例约1∶1。将大鼠随机分为3组，每组35只。假手术组(sham组)仅进行中位颈部切口，未进行缺氧缺血模型处理；模型组(HIBI组)根据动物模型制备方法进行缺氧缺血处理；丙酮酸乙酯处理组(EP组)于缺氧缺血处理30 min前进行3 mg/kg EP腹膜内注射[7]。EP购自Sigma-Aldrich，使用生理盐水配制溶液。

    1.2 HIBI模型 根据参考文献[8]，将大鼠用3%～4%异氟烷麻醉后，分离其左颈总动脉并进行6-0手术结扎。经2 h恢复期后，将幼仔置于37 ℃水浴密闭缺氧箱中，持续给予8%O2和92%N2混合气体进行缺氧处理2.5 h。

    1.3 海马超微结构 缺氧缺血后24 h，每组取5只大鼠幼仔迅速断头处死。取出脑组织，于4 ℃先用2.5%戊二醛溶液处理，之后用1%锇酸固定，以乙醇和丙酮梯度脱水后，环氧树脂包埋，获得超薄切片后，进行乙酸双氧铀和硝酸铅双重染色，在透射电子显微镜下观察切片并拍照。

    1.4 2，3，5-三苯基四氮唑-水合物(TTC)染色 缺氧、缺血后48 h ......