马培泽，孙正新2，杨 春，姜月华3，吕 娟

    细胞在应激状态下，适度的自噬能够促进细胞自我吞食，保护细胞抵抗不利环境，促进细胞存活，而过度自噬则诱导细胞走向程序性死亡[1-4]。心肌缺血时，自噬活性的改变很可能影响血管内皮的结构和功能，而血管内皮细胞功能改变与心血管疾病的发生发展密切相关，因此，研究自噬在缺血心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺血损伤中的作用，将有助于发现新的方法应用于缺血性疾病的治疗。过去的研究多集中于对心肌细胞的保护，而忽视了对CMECs缺血损伤的关注。迄今为止，自噬在缺血CMECs的作用尚未明确，基于细胞自噬探讨中医药保护血管内皮的作用，鲜见报道。鉴于此，本课题在原有研究基础上，建立缺血CMECs模型，基于细胞自噬探讨中医药保护血管内皮的干预效应。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 选用SPF级6周龄雄性SD大鼠，体重220～280 g，45只，由山东鲁抗医药股份有限公司提供。所有大鼠均采用笼养，生存在明暗各12 h饲养环境中。

    1.2 主要仪器 流式细胞仪(德国Beckman公司)，酶标仪(美国Thermo Scientific公司)，低温高速离心机(美国Thermo Scientific公司)，透射电镜(日本JEOL公司)，CO2培养箱(美国Heraeus公司)，心电图机(北京福田电子医疗仪器有限公司)，呼吸机(美国BIRD公司)，BIO-RAD电泳仪(美国BIO-RAD公司)，Axiovert 40C倒置相差显微镜(德国Zeiss公司)，BIO-RAD半干转膜仪(美国BIO-RAD公司)，LAS-4000型化学发光及荧光影像分析仪(日本FUJIFILM公司)。

    1.3 药品与试剂 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(杭州联科生物有限公司)，3甲基腺嘌呤(3-MA，美国Sigma-Aldrich)，雷帕霉素(美国Cell Signal Technology)，祛风生脉颗粒(北京康仁堂药业有限公司)，DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司)，PBS平衡液(上海碧云天生物技术有限公司) ......