方晨晨，金晓露，徐倩倩，沈 洁，李 茜，沈梅红

    电针/针刺对脑血管性神经系统损伤细胞凋亡的影响受到广泛关注，有研究发现，针刺能抑制Bcl-2 家族中具有促凋亡作用的Bax 表达，并促进具有抗凋亡作 用 Bcl -2 的 表 达[1-2]。NF -E 2 p 4 5 -related factor 2( Nrf2) 信号是近年来国内外研究发现的机体抵抗体内外氧化和化学等伤害性刺激的防御性转导通路之一[3]。课题组前期研究表明，电针可调节脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层Nrf2 蛋白的表达[4]，该因子不仅是细胞抗氧化反应的中枢调节者，相关研究认为其可降低对凋亡信号的敏感性[5-6]。电针对脑缺血再灌注损伤中细胞凋亡的保护作用是否受到Nrf2 信号通路的调节? 本研究以Nrf2 基因敲除小鼠( Nrf2 knocked out，KO) 制备脑缺血再灌注模型为研究对象，探讨Nrf2 与神经元细胞凋亡之间的关系，以期为针刺治疗缺血性脑中风提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 健康雄性Nrf2-/-型小鼠，体重28 ～32 g，6～8 周龄，由南京军区南京总医院提供。所有动物均饲养在清洁级环境下，光照正常，饮水自由，环境温度25 ℃，湿度50% ～60%，空间内通风良好。本实验已通过南京中医药大学动物伦理委员会批准。

    1.2 主要试剂及器材 单克隆 Bax 一抗( 货号: sc-7480，Santa 公司) ; 单克隆 Bcl-2 一抗( 货号: sc-7382，Santa 公司) ; SABC 免疫组化染色试剂盒、DAB 显色试剂盒( 武汉博士德生物试剂有限公司) ; RT-PCR 反转录试剂盒( 大连TaKaRa 生物公司) 。

    1.3 主要实验器材 韩氏HANS -200 型电针仪( 南京济生医疗有限公司) 、电子分析天平( 上海卓精) 、石蜡切片机RM 2145( 德国LEICA 公司) 、荧光多功能显微镜BX60( 日本OLYMPUS 公司) ; 图像分析仪( CMIAS 98A，北京航空航天大学) ; Verity 96 孔板热循环仪( 美国Applied Biosystems 公司) ; 核酸蛋白检测仪( 德国Eppendorf 公司) ; PCR 扩增仪 7500( 美国 Applied Biosystems 公司) 等 ......