何 莉，刘 芸2，张 瑶3，梁 昊，张秋雁，聂 娟，杨 漾，谢 辉

    缺血性心脏病是由于冠状动脉循环改变引起冠状动脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，其中以冠状动脉粥样硬化引起的冠状动脉狭窄和闭塞为特征的冠心病(coronary artery disease， CAD)是其最常见类型，严重危害人类健康，尽管人们采取了各种现代化治疗方法，如静脉溶栓、抗血小板聚集、心脏介入等，其发病率和死亡率均仍居各类致死性疾病前列。CAD发生后，除疏通阻塞的冠状动脉外，还可以通过血管新生产生侧支循环实现“自我搭桥”，挽救更多的心肌，从而降低病死率[1-2]。作为血管内皮前体细胞的内皮祖细胞(EPCs)在血管新生中扮演着重要的角色[3]。然而，病理状态下EPCs存在衰老现象，严重影响其增殖和功能[4]。因此，延缓EPCs衰老、促进EPCs的迁移是实现冠状动脉阻塞后血管新生的关键环节。

    活血化瘀是中医学治疗冠心病的根本大法，血府逐瘀汤又是活血化瘀的经典名方，大量临床研究证实其具有较好的抗心肌缺血作用。研究发现血府逐瘀汤可诱导EPCs迁移至缺血区，促进血管新生，进而改善缺血区心肌缺血坏死[5]，这种作用可能是通过抗EPCs衰老而实现的。本实验观察血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠骨髓源内皮祖细胞衰老、迁移功能及miR-34a表达的影响，探讨血府逐瘀汤抗衰老的作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物 取原代EPCs用的SD雄性大鼠40只，4周龄，体质量100 ～110 g，动物合格证：43004700025025。取血清用的SD雄性大鼠，40只，体质量250 ～280 g，动物合格证：43004700024153。以上动物均由湖南中医药大学动物实验中心提供，湖南中医药大学实验动物中心清洁级动物房饲养，饲养环境：温度20～25 ℃，湿度55%～60%，通气良好。

    1.2 药物 血府逐瘀汤出自王清任《医林改错》，组方：当归三钱(9 g)，生地三钱(9 g)，桃仁四钱(12 g)，红花三钱(9 g)，枳壳二钱(6 g)，赤芍二钱(6 g)，柴胡一钱(3 g)，甘草二钱(6 g)，桔梗一钱半(4.5 g)，川芎一钱半(4.5 g)，牛膝三钱(9 g)。药材购于湖南中医药大学第一附属医院。药液制备：加10倍量水浸泡0.5 h，然后用电热套加热回流提取1 h，滤过；第2次加8倍量水，同法再煮1 h。合并两次煎液，浓缩至含生药量1.56 g/mL。

    1.3 试剂 EGM-2培养基：美国LONZA公司(CC-4147)；青-链霉素：碧云天公司(ST488)；大鼠骨髓源淋巴细胞分离液：天津灏洋公司(LTS1083)；磷酸缓冲盐溶液(PBS)：Hyclone公司(SH30256.01B)；DMEM高糖培养基：Hyclone公司(SH30023.01B)；胎牛血清(fetal bovine serum ......