张 毅，魏绪旺，许 康，张 昭，薛瑶瑶，范天祥

    脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)后大量神经细胞凋亡是造成ICH后神经功能障碍的根本原因[1]。目前修复神经方面的药物多为脑源性神经营养因子，只能保护未受损的神经细胞，缺少直接促进神经干细胞(neural stem cells，NSCs)增殖的药物。研究证实，海马区存在NSCs，ICH后海马区域产生的新生神经元可以迁移到脑损伤区域，有效改善神经功能缺损[2]。而海马区神经发生的过程主要包括NSCs的增殖、分化以及迁移，这一过程受到Notch信号的调控，Notch信号通路在脑损伤时被激活，参与ICH后的神经再生与修复过程[3]。补肾填精益髓方源于刘完素《黄帝素问宣明论方》中的地黄饮子，研究证实地黄饮子能够促进NSCs增殖分化，并改善其神经功能[4-5]。因此，本实验通过建立ICH大鼠模型，基于Notch信号通路灌服补肾填精益髓方，观察ICH大鼠Bederson神经功能评分、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/神经元核抗原(NeuN)阳性细胞数、Notch-1蛋白表达变化，探讨补肾填精益髓法对ICH大鼠的神经保护作用及Notch-1蛋白表达的影响，明确其具体作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 实验用健康SD大鼠126只，体重200～250 g，动物许可证号：SCXK，陕2017-003，购自西安交通大学实验动物中心，饲养于陕西中医药大学药学院实验中心动物房，室温度维持在22 ℃左右，室内湿度维持在30%～40%。

    1.2 实验药物 10%水合氯醛(上海运佳黄埔制药)、0.5%碘伏消毒液(规格为每瓶100 mL)、单唾酸神经节苷脂注射液(北京赛升药业股份有限公司)、0.9%氯化钠注射液(广东艾希德药业有限公司)、γ-分泌酶抑制剂(DAPT，武汉博士德生物工程有限公司)。补肾填精益髓方组成：熟地黄15 g，山茱萸15 g，肉苁蓉10 g，巴戟天10 g，炮附子6 g，肉桂12 g，石斛12 g，麦冬12 g，石菖蒲10 g，远志10 g，茯苓10 g，生姜3片，大枣5枚。由陕西中医药大学附属医院药剂室提供，符合2015年版《中国药典》规范，按人与动物体重剂量折算表进行浓缩，煎药浓缩成生药浓度为1.54 g/mL，4 ℃冰箱保存备用。

    1.3 实验试剂 Anti-β-catenin抗体(ABCAM公司)、多聚体抗兔IgG-HRP(ABCAM公司)、免疫组化试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)、Notch-1抗体(武汉博士德生物工程有限公司)、BrdU抗体(武汉博士德生物工程有限公司)、Anti-NeuN Antibody(武汉博士德生物工程有限公司)、正常山羊血清(武汉博士德生物工程有限公司) ......