心力衰竭是多种心血管疾病发展的终末阶段，目前已成为仅次于恶性肿瘤且严重危害人类健康的主要疾病[1]。治疗心力衰竭主要目的是防止并延缓疾病发生发展，减轻临床症状，提高病人生存质量，改善长期预后。有研究显示，心肌细胞株凋亡是心力衰竭发生发展的重要病理基础[2]，而氧化应激反应在心肌细胞株凋亡中发挥关键作用[3]。中医中药治疗心血管疾病作用已得到临床证实，因其安全、与西药协同治疗效果显著被广泛应用[4]。中药作用机制复杂多样，多项研究表明，中药可有效抑制心肌细胞株的氧化应激反应，地榆皂苷Ⅱ是从地榆中分离的三萜皂苷类化合物，药理研究发现其具有抗氧化应激、抑制细胞凋亡，并抗炎、消肿、止泻和抗溃疡作用[5-6]；地榆皂苷Ⅱ可有效改善化疗、放疗对癌症病人造成的外周血细胞减少[7]。但地榆皂苷Ⅱ是否可抑制心肌细胞株的氧化应激反应研究报道较少。本研究探讨地榆皂苷Ⅱ对H2O2诱导的大鼠H9C2心肌细胞株凋亡的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 地榆皂苷Ⅱ购自上海纯优技术有限公司(货号：PO792)，分子式：C15H12O6；H9C2心肌细胞株购自中科院上海细胞库；细胞培养采用达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、青链霉素双抗购自Gibco公司；采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)试剂及流式细胞盒购自碧云天技术(上海)有限公司；细胞裂解液购自上海联迈生物工程有限公司；抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)鼠单克隆抗体，Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、细胞磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)、卵黄状黄斑病蛋白3(Bestrophin3)、细胞外信号调节激酶(REK1/2)抑制剂LY3214996购自英国Abcam公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 使用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养H9C2心肌细胞株，培养箱设置条件37 ℃，5%CO2，湿度为95%，每两天换液1次，细胞密度达到培养皿90%时进行传代培养，传代密度为1×104个/mL ......