武卫党，张丹凤，郭纪文，徐晓辉，路 艳，陈文璐，耿蓬勃

    心肌缺血/再灌注造成的损伤是目前临床限制冠状动脉介入治疗、冠状动脉搭桥和冠状动脉溶栓等治疗手段有效开展的关键问题，且可能导致心肌缺血/再灌注性二次损伤，严重限制上述手术治疗手段的广泛运用，给病人健康带来了极大风险[1]。五味子乙素是在中药北五味子中含量最高的联苯环辛烯类木脂素。北五味子属于收敛固涩药，具有益气生津、宁心安神功效，使其广泛存在于补益类的方剂之中，同时具有辛、甘、酸、苦、咸五种药性，酸、咸入肝而补肾，辛、苦入心而补肺，甘入中宫益脾胃，常用于治疗肝脏疾病。有研究发现，北五味子乙素对大鼠心肌缺血再灌注损伤有一定的保护作用，其机制可能与减少氧自由基释放、保护缺血心肌免受缺血再灌注损伤有关，北五味子乙素对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤具有保护作用，通过诱导自噬改善缺血再灌注损伤发生[2-4]。内质网是细胞蛋白合成的主要场所，在缺氧、氧化应激等情况下，内质网未折叠的蛋白质明显增多，当超过内质网处理能力，细胞激活相关信号级联反应，恢复内质网蛋白质折叠环境，但持续的内质网应激发生可诱导下游分子激活，直接诱导细胞凋亡发生，也导致线粒体氧化应激反应，影响线粒体功能。线粒体是细胞能量发生器，线粒体功能异常进一步促进细胞凋亡的发生[5-6]。本研究将通过建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型及内质网激动剂诱发的大鼠心肌细胞内质网应激模型，探讨五味子乙素对心肌细胞缺血再灌注及内质网应激导致线粒体损伤的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料及主要仪器 五味子乙素、毒胡萝卜素内脂购自Sigma公司。H9c2大鼠心肌细胞株购自中国科学院上海细胞库；改良Eagle培养基(DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自GIBCO公司；ATP检测试剂盒、线粒体提取试剂盒均购自江苏碧云天生物技术研究所；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)，线粒体呼吸链复合酶试剂盒(南京建成生物工程公司)；细胞色素C、Caspase 3、Caspase 9酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(Santa，美国)。主要仪器Heracell 240i型二氧化碳培养箱(Thermofisher公司 ......