武伟男，许小斌，连世忠

    基因启动子区高度甲基化可以关闭某些基因尤其是抑癌基因的活性，导致基因表达受限，表达量降低，从而影响细胞的增殖[1-3]。一些研究发现，微小RNA-147(miR-147)在肺癌、卵巢癌等肿瘤组织中可以抑制肿瘤细胞的增殖，起抑癌基因的作用[4-6]。而目前及既往研究中并未提及miR-147启动子区甲基化在胶质瘤研究中的相关报道，本实验应用恶性胶质瘤细胞U87细胞模拟人体胶质瘤组织，探究U87细胞中miR-147基因启动子区甲基化程度与miR-147表达量及细胞增殖的关系，为胶质瘤的诊断以及治疗提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 U87细胞(北京协和医学院基础所细胞中心)；DMEE高糖培养基、无菌磷酸缓冲盐溶液(PBS)溶液等；双抗；洁净工作台(江苏苏洁净化设备厂)；低速低温离心机、移液器(Eppendorf)；PCR仪、测序仪(美国ABI)；电泳仪、电泳槽(北京六一仪器厂)；冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；台式高速离心机(湖南湘仪实验仪器开发有限公司)；凝胶成像仪微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；数显恒温水浴锅(太仓市科教器材厂)；BP系列精密单道可调移液器(加拿大BBI)；UV-Vis Spectrophotometer(Merinton)；冰箱(青岛海尔股份有限公司)。其余试剂以及所用仪器均购置于上海生工股份有限公司。

    1.2 配制不同浓度5′aza-dC DMEM高糖培养基 首先配制成浓度为1 mmol/L的储存浓度，然后分别用DMEM高糖培养基稀释 ......