清达颗粒对脑缺血再灌注大鼠炎症损伤的保护作用研究
星形,胶质,1材料与方法,2结果,3讨论
贾贝贝,蔡巧燕,2,3,张 铃,2,3,沈阿灵,2,褚剑锋,2,3,彭 军,2,3已有研究证明,缺血缺氧所致的炎症反应是缺血性脑卒中重要的病理进程,炎症反应是预防和治疗脑缺血的关键[1]。 中药清达颗粒是由国医大师陈可冀院士60余年来治疗高血压的临床经验用方清眩降压汤精简而来,具有清肝热、平肝阳、泻心火的功效,对高血压前期、新发1级高血压证属肝火上炎、肝阳上亢具有良好的疗效。结合前期药效学研究结果,该方不仅能有效降低高血压模型大鼠血压,而且能抑制高血压模型大鼠心脏炎症反应,从而抑制高血压引起的心脏重构[2-3]。因此,本研究利用大脑中动脉闭塞(MCAO)模型观察中药清达颗粒对脑缺血再灌注大鼠脑局部炎症反应的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 取8周龄SPF级雄性SD大鼠32只,体质量250~280 g,购自北京维通利华实验技术有限公司,实验动物许可证号:SCXK(京)2016-0006,常规饲养,环境温度(24±1)℃,湿度(55±5)%,术前12 h禁食、不禁水,术前4 h禁水。动物实验程序严格按照国际伦理准则和国家卫生研究院关于实验室动物护理和使用指导方针进行,本研究得到福建中医药大学机构动物护理和使用委员会批准。
1.2 实验药物 中药清达颗粒由天麻12 g,钩藤10 g,黄芩6 g,莲子心5 g组成, 由江阴天江药业有限公司制备成免煎颗粒剂并提供使用。中药清达颗粒一剂为1日使用量,每剂浓缩为清达颗粒免煎剂后为8 g,成品每包54 g,临床每日使用免煎剂药量为8 g。药材鉴定和药材质量标准、颗粒剂质量标准由天江药业完成,均按药典标准检验合格。
1.3 主要试剂 白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体(英国Abcam公司);苏木素染色液、伊红染色液和2% TTC染色液(北京索莱宝科技有限公司);即用型免疫组化试剂盒(鼠/兔)、磷酸缓冲盐溶液(PBS,粉剂)、粉剂型抗原修复液(柠檬酸法)、凯基DAB显色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司);硅胶线栓(广州佳灵生物技术有限公司,L 3600);其他试剂均为国产分析纯。
1.4 主要仪器 切脑模具(深圳市瑞沃德生命科技有限公司);生物组织自动脱水机和生物组织石蜡包埋机(孝感亚光公司);全自动石蜡切片机、DM4000B显微镜(德国徕卡有限公司);形态学显微图像分析系统(Leica LAS V 4.1和Motic 6.0)。
1.5 实验方法
1.5.1 局灶性脑缺血再灌注大鼠模型制备及动物分组 局灶性脑缺血再灌注模型采用硅胶线栓插入法栓塞大鼠大脑中动脉制备[4] ......
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