严 澎，杨 斌，李文波，何玉清，阮春云

    促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)又称红细胞因子与促红素，为人体内源性的糖蛋白激素，主要通过与其受体结合起作用，具有刺激红细胞生成的功能[1]。既往研究显示EPO不仅在胎儿的肝脏、成年人的肾脏中表达，也在非造血系统表达，如神经元、血管内皮细胞以及胶质细胞。近年来，研究显示EPO与脑缺血疾病的进展有关，早期运用外源性的EPO对缺氧缺血性新生大鼠的脑损伤有神经保护作用[2]。本研究通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立慢性脑缺血大鼠模型，探讨EPO对慢性脑缺血大鼠脑组织凋亡与促凋亡蛋白表达水平的影响，为临床治疗慢性脑缺血病人的药物设计提供动物实验理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器 兔抗鼠Caspase-3抗体(上海优宁维公司生物科技有限公司)，兔抗鼠Bax抗体(上海优予生物科技有限公司)，兔抗鼠Bcl-2抗体(上海恒斐生物科技有限公司)，小鼠抗人Omi/HtrA2抗体(艾美捷科技有限公司)，ECL试剂盒(上海经科化学科技有限公司)，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒(上海远慕生物科技有限公司)，过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒(上海研谨生物科技有限公司)，EPO(Theramabs)，二甲基亚砜(DMSO，Sigma)。冷冻离心机3K15(Sigma)，正置荧光显微镜FM-51D(上海绘统光学仪器有限公司)，全自动轮盘式切片机(LEICA)。

    1.2 实验动物 无特定病原体(SPF)级健康雄性16～20周龄SD大鼠96只，体重250～300 g，购于武汉大学中南医院动物实验中心，许可证号：SYXK(鄂)2015-0025，购回饲养1周，再用于后续实验，饲养温度维持在20～25 ℃，空气湿度为50%～55%，光照为人工光照，昼12 h、夜12 h，所有大鼠全天饮水自由。

    1.3 模型制备与动物分组处理 采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立慢性脑缺血大鼠模型，选取24只SD大鼠，随机分为对照组与假手术组，每组12只，再选取30只SD大鼠作为建模组，用于建立慢性脑缺血模型。建模组大鼠于建模前12 h禁食 ......