陈 莉，范晓迪，史大卓，白瑞娜

    血管内皮损伤是高血压[1]、脑梗死[2]、冠心病[3]等多种心脑血管疾病的共同病理基础，为动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)病变的起始阶段。内皮细胞损伤可引起白细胞黏附聚集、血小板活化、炎症介质和炎性因子释放及血栓形成等多种病理改变[4-5]。因此，保护血管内皮功能成为防治动脉粥样硬化性疾病的重要研究方向。既往研究显示，核因子-κB(NF-κB)活化可诱导内皮细胞的炎症反应，加剧血管内皮损伤，促进AS的发生发展[6-7]。YY1为锌指蛋白家族亚组成员之一的多功能转录因子，在炎症反应和免疫反应中发挥着重要作用[8-9]。NF-κB可通过结合到YY1的启动区以调控其表达，发挥促AS的作用[10]。前期研究表明，NF-κB/YY1信号通路在血管内皮炎症反应过程中发挥着重要作用。芍药苷是从赤芍中提取的单体成分，属于单萜类化合物。现代药理研究显示，芍药苷具有抗炎、抗氧化应激、抗血小板聚集、抗血栓等多种生物学活性，临床中广泛应用于心脑血管疾病的防治[11-13]。有研究显示，芍药苷可通过抑制NF-κB信号通路改善炎症反应，但其具体作用机制仍有待进一步研究[14]。基于此，本研究构建肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的体外模型，探讨芍药苷对血管内皮细胞的保护作用及对NF-κB/YY1信号通路的影响，以期为防治动脉粥样硬化性疾病提供客观依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 HUVECs细胞株购自美国ScienCell公司(货号：8000)。TNF-α 购自美国PeproTech公司(批号：300-01A)，双氧水充分溶解，0.22 μmol/L孔径滤膜过滤，配成20 ng/mL的母液，-20 ℃冰箱分装保存备用。芍药苷(批号：CP8129)购自中国碧云天公司，纯度>98%。将48 mg芍药苷溶解于500 μL的二甲基亚砜(DMSO)中，充分溶解，过滤，配成200 μmol/L母液，-20 ℃冰箱分装保存备用，实验前用培养液稀释成所需浓度。内皮细胞培养基(ECM，批号：#1001)、胎牛血清(批号：#0025)、内皮细胞生长因子添加物(批号：#1052)均购自美国ScienCell公司。胰蛋白酶(trypsinase，批号：SH40003.01)、磷酸缓冲盐溶液(PBS，批号：SH30256.01)均购自美国life sciences公司。Trizol Reagent(批号：#15596018)购自美国Life Technologies公司 ......