杨 艳，杨爱明，孙 俊，张 征，白 翔

    阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease， AD)又称为慢性老年痴呆症，其发生与遗传、机体炎症感染、铝中毒、钙失衡等密切关联，主要病理变化为神经纤维缠结、神经元变性丢失、老年斑沉积，并伴随弥漫性大脑皮层萎缩[1-2]。AD的发病机制尚未完全明确，目前β样淀粉蛋白(Beta-like amyloid， Aβ)级联反应已成为主流观点，即Aβ沉积导致大脑神经元变性、缺失，造成AD病人记忆、认识损伤[3]。在AD发生发展过程中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号途径是调控神经元细胞生长、存活的重要通路，一方面可调控抗凋亡和促凋亡基因的表达抑制细胞凋亡，同时还能促进环磷酸腺苷(cAMP)反应序列结合蛋白(cAMP responsive element binding protein， CREB)的磷酸化，诱导cAMP反应序列基因表达，维持细胞存活，在神经元再生、突触形成及学习记忆等方面具有重要的调节作用[4-5]。现代药理学研究表明藏花素可维持神经元生存，激活小胶质细胞，降低炎性介质诱导的神经毒性，同时还能破坏早期Aβ聚集及纤维化的形成，发挥神经保护作用改善[6]。但是对其具体作用机制，文献报道并不多见。Aβ沉积以及tau蛋白磷酸化、老年斑形成、神经原纤维缠结是AD的病理学特征。其中Aβ级联反应假说核心理论为脑内异常沉积的Aβ通过一系列复杂的病理机制导致大脑神经元变性、缺失，最终导致认知功能损害是造成AD病人记忆认知损伤的始动因素。Aβ25～35是阿尔茨海默氏淀粉样蛋白β肽的Aβ(25～35) 片段，可引起神经细胞Aβ沉积，显示出神经毒性活性，已经广泛用于AD细胞模型的建立。本实验应用Aβ25～35处理大鼠海马神经元建立AD细胞模型，探讨藏花素发挥神经保护的作用及其具体机制，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料 动物来源：SD大鼠，体质量(250±20)g，购于上海斯莱克实验动物有限公司， 许可证号SCXK (沪) 2012-0002。试剂耗材：藏花素(纯度>95%；批号19042401)购于沈阳药科大学中药学院；DMEM培养基(批号：AB10110957)购于Hyclone公司；二甲基亚砜、噻唑蓝(MTT)、Aβ25～35购于Sigma公司；乳酸脱氢酶活性检测试剂盒购于碧云天生物技术研究所；TRIzol试剂盒购于北京华迈科生物技术有限责任公司；DAB显色试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司；HRP标记山羊抗小鼠和抗兔IgG均购于北京博奥森生物技术有限公司 ......