丹参酮ⅡA通过NF-κB通路抑制脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞炎性反应的作用机制
培养箱,孵育,1材料与方法,2结果,3讨论
何德全,陈友权,王世祥动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是指以动脉内膜有脂质等血液成分的沉积、平滑肌细胞增生和胶原纤维增多,形成粥糜样含脂坏死病灶和血管壁硬化为主要表现的一种疾病,是心血管疾病的主要病理基础,由动脉粥样硬化导致的心血管疾病已经成为全球死亡的首要原因[1]。目前,越来越多的证据表明,动脉粥样硬化是一种炎症和免疫性疾病。研究显示,血管内皮细胞作为血管壁的重要组成部分,其损伤所导致的异常增殖和凋亡是动脉粥样硬化性疾病发生、发展的共同病理生理基础[2-3]。核转录因子-κB(NF-κB)是一类具有启动基因转录功能的蛋白质,存在于包括心血管细胞在内的多种细胞中,调控细胞的生存、免疫、增殖和凋亡等一系列生理病理过程[4]。NF-κB的活化对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放起决定性作用。持续激活的NF-κB通过促进TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)等细胞因子的表达促发一系列免疫炎性反应,导致细胞损伤。因此,适当抑制NF-κB的活化对心肌重构有积极治疗作用[5]。丹参酮ⅡA是丹参的脂溶性有效单体,具有抗氧化、抑制血小板聚集和抗凝血、抑制平滑肌细胞的增殖、扩张冠状动脉及抗炎的作用,是一种天然的抗动脉粥样硬化药物[6]。Yang等[7]研究表明,在内皮祖母细胞中丹参酮ⅡA可以通过抑制NF-κB活性,下调TNF-α依赖的血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。因此,丹参酮ⅡA不仅具有抗炎症的作用,还具有潜在的抗动脉粥样硬化作用。本研究拟观察丹参酮ⅡA通过NF-κB通路对脂多糖致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,为临床动脉粥样硬化治疗提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料 丹参酮ⅡA(纯度98%)购自成都普瑞法公司,HUVECs购自中国科学院上海细胞生物学研究所,脂多糖购自美国Sigma公司,RPMI-1640培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶均购自美国Gibco公司,CCK-8试剂盒购自日本同仁研究所,酶联免疫吸附试验试剂盒购自美国BOSTER公司,RIPA裂解液购自北京索莱宝公司,兔抗VCAM-1单克隆抗体购自英国Serotec公司,TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和GAPDH单克隆抗体和山羊抗兔(鼠)IgG二抗购自美国Cell Signaling Technology公司 ......
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