张兴博,梁健芬,陈 炜,徐柳炎,蒙健林

    帕金森病(Parkinson"s disease,PD)是临床常见的神经系统退行性疾病,同时也是中老年人致残的主要原因之一,其病理变化主要为黑质致密部多巴胺(dopamine,DA)能神经元的变性缺失。在PD 发病过程中,大量的α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)异常折叠和聚集依旧是PD 发病的中心事件[1],而激活自噬可加速α-syn 的降解进而参与PD 的发病[2],同时,PD 多巴胺能神经元自噬又受到转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)的调控,现已证实,在PD 细胞自噬过程中TFEB是多巴胺能神经元自噬调节的关键信号分子,其可通过调控自噬,阻断异构α-syn 蛋白聚集[3],进而阻止多巴胺能神经元死亡。本研究以鱼藤酮诱导的PD 大鼠作为研究对象,在中医理论的指导下,给予加味五虎追风散治疗,观察其对PD 大鼠黑质TFEB、微管相关膜蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)Ⅱ、泛素结合蛋白P62(P62)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达的影响及对α-syn 的清除作用,以探讨加味五虎追风散治疗PD 的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SPF 级SD 大鼠60 只,雄性,体重200～250 g,实验动物由广西医科大学动物实验中心提供(动物合格证号SCXK 桂2009-0002)。所有大鼠在通风良好的条件下分笼饲养,自由摄食及饮水。

    1.2 药物、试剂与仪器 加味五虎追风散方药组成:蝉蜕6 g,天南星6 g,天麻12 g,全蝎3 g,僵蚕10 g,大地棕根15 g。使用中药配方颗粒剂,由江阴天江药业有限公司提供,产品批号:1401018。鱼藤酮、葵花乳油均购自Sigma 公司;兔多克隆α-syn 抗体、兔多克隆LC3 抗体、兔源P62 多克隆抗体均购自英国Abcam 公司;鼠抗酪氨酸羟化酶抗体购自北京碧云天生物有限公司;Actin 抗体购自武汉博士德生物工程有限公司;其他试剂均为市售、分析纯化 ......