李燕宏,丁 鑫,杜 坚,张红梅

    脑梗死又称缺血性脑卒中,是由各种原因引起的局部脑组织缺血缺氧性坏死,进而产生临床上对应的神经功能缺失表现。由于大多数脑梗死是血栓堵塞脑动脉所致,血小板聚集又是血栓形成的关键步骤,因而抗血小板聚集治疗一直是治疗和预防这类疾病的重要手段[1]。为此,脑梗死病人需要长期服用阿司匹林等抗血小板药聚集物来预防疾病的发生。而在脑梗死治疗过程中,病人脑组织结构与功能的修复主要依赖于病灶区的神经元再生和血管重建过程[2-4]。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)被认为在中枢神经系统再生与修复中起着重要作用[3]。那么,这些抗血小板聚集药物是否能调控NSCs 目前少有报道。磷酸二酯酶3 型抑制剂西洛他唑(cilostazol)作为一种抗血小板药物,常用于缺血性脑卒中的治疗[5]。近年来,有研究显示,除了抗血小板聚集的作用以外,西洛他唑在减少血管意外事件方面要优于阿司匹林[6];单独应用西洛他唑也能减轻动物模型的脑梗死区范围[7]。但是,西洛他唑是否通过调节NSCs 而介导对脑梗死的保护性作用目前并不清楚。为此,本研究通过小鼠海马NSCs 糖氧剥夺性损伤模型,探讨西洛他唑对小鼠海马NSCs 的保护性作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 SPF 级C57BL/6 小鼠(8 周龄)由成都医学院实验动物中心提供。雌鼠、雄鼠按照2∶1 比例合笼喂养,雌鼠交配受孕后自然分娩。取其1 d 龄新生C57BL/6 小鼠,用于海马NSCs 的分离培养。

    1.1.2 主要药品及试剂 西洛他唑购自Sigma-Aldrich 公司;抗Nestin(批号:ab105389)、Alexa Fluor 488 荧光标记二抗IgG(批号:ab150077)、抗Bax(批号:ab32503)、抗Bcl-2(批号:ab196495)、抗C/EBP 同源蛋白(CHOP,批号:ab179823)购自Abcam 公司;抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体购自Santa Cruz公司(批号:sc-25778);抗活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF-4)抗体购自Cell Signaling技术公司(批号:11815);ATF-4 siRNA 由锐博生物公司合成,转染试剂Lipofectamine2000 购自Invitrogen公司;CCK-8 检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司(批号:C0042) ......