丁海月，薛 冰，刁华琼，魏 丹，李小黎

    神经干细胞(neural stem cells，NSCs)是指分布于神经系统的具有自我更新和多分化潜能的干细胞。其主要功能是作为一种储备，参与神经系统损伤修复或细胞正常死亡的更新。因此，NSCs在中枢神经系统损伤和退行性疾病中可能发挥重要的治疗作用[1-2]，如帕金森病、阿尔茨海默病、缺血性脑卒中等疾病[3]。脑内海马区分布的NSCs较多，尤其海马齿状回是哺乳动物脑内存在NSCs的主要区域之一。NSCs的增殖与分化有益于神经系统的生长发育，对学习和记忆有着重要的作用[4-5]。然而NSCs的原代培养难度大，细胞活力低，纯度不高。因此，本实验取新生大鼠海马组织，总结一种体外培养海马NSCs的简便方法，为进一步研究神经系统疾病中NSCs的增殖分化提供实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 新生24 h的SD大鼠，普通无特定病原体(SPF)级，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2019-0010。

    1.2 主要试剂与仪器 DMEM/F12培养基、B27、青链霉素(美国Gibco公司)；表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF，美国Proteintech公司)；D-Hanks液(美国HyClone公司)；5-嗅-2-脱氧尿苷(5-Bromo-2-deoxy-uridine，BrdU)、二甲基亚砜(DMSO)、多聚赖氨酸(美国Sigma公司)；兔抗巢蛋白(Nestin)抗体、小鼠抗BrdU抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG、Cy3标记羊抗小鼠IgG(美国Peprotech公司)；二氧化碳培养箱(德国Memmert公司)；激光共聚焦显微镜(日本OLYMPUS公司) ......