艾克热木·吐尔逊

    心肌细胞凋亡属于心肌细胞的程序性死亡，在心肌梗死后的心脏重塑中发挥着重要作用，同时在心力衰竭病理生理过程中也扮演着重要角色。抑制心肌细胞凋亡能有效减轻心肌缺血再灌注损伤，改善心脏重塑过程，延缓心力衰竭的发生，因此，抑制心肌细胞凋亡逐渐成为治疗各种心血管疾病的关键[1-2]。miRNA 是在真核生物中发现的一类内源性的非编码RNA分子，主要在转录后水平调控基因的表达[3]。研究指出，miRNAs参与动脉粥样硬化斑块形成、心肌梗死后血管再生、心肌重构等多项心血管疾病的发生发展，某些miRNAs还可帮助减少心血管事件中心肌细胞的凋亡，抑制组织损伤，促进血管再生，控制室壁纤维化程度，从而改善病人预后[4-5]。miR-766 是近年来被鉴定出具有抑制心肌细胞凋亡作用的miRNA之一。本研究拟明确miR-766在心肌细胞凋亡中的作用及其与相关靶基因的作用关系，为探讨心肌细胞凋亡的分子信号通路研究提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 细胞：H9C2心肌细胞购于ATCC(American type culture collection)。主要试剂：DMEM/F12培养基、胰蛋白酶、胎牛血清(GIBCO公司)，TRIZOL、PBS缓冲液(Sigma公司)，SYBR Premix Ex Taq(TAKARA公司)。miR-766 NC、miR-766 mimics、miR-766 NC inhibitor、miR-766 inhibitor(Thermo Fisher Scientific)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 将H9C2细胞置于含10%胎牛血清FBS和DMEM/F12培养基中，于5%二氧化碳、37 ℃条件下培养。取对数生长期细胞制成细胞悬液，接种于六孔板中，每孔约105个细胞。

    1.2.2 细胞转染 提前1 d将所需离心管与枪头高压灭菌，根据GenMuteTm reagent (signagen)试剂操作指南进行转染(六孔板为例)，当细胞生长密度为50%～60%时，取对数生长期细胞1.5×105个接种于六孔板，以次日贴壁细胞量达50%～60%为宜，次日分别以miR-766 NC、miR-766 mimics、miR-766 NC inhibitor、miR-766 inhibitor转染不同孔中 ......