李 熠，冯 健

    糖尿病是目前威胁人类健康的主要疾病，长期高血糖、有氧代谢降低的环境可引起心肌细胞代谢与钙转运发生紊乱，凋亡增多，从而引起心室重构、充血性心力衰竭，其发生发展机制较复杂，至今仍未清楚[1]。心肌细胞肥大病人在高糖等多种病理性刺激下可引起心肌细胞的表面积增加、细胞蛋白含量上升，促肥厚基因CARK(Cardiac Ankyrin Repeat Kinase)等表达水平升高，目前认为这种改变可能与相关受体异常表达有关[2-3]。G-蛋白偶联胆汁酸受体1(G protein-coupled receptor for bile acids，TGR5或GPBAR1)属于G-蛋白偶联受体(GRCP)家族，其激活后可改善机体脂质、糖代谢紊乱与胰岛素抵抗，减轻氧化应激，防止糖尿病、代谢综合征等[4]。有研究发现，糖调节受损与2型糖尿病(T2DM)病人的血清TGR5水平较糖耐量正常人群下降，且在T2DM病人中男性血清TGR5较女性高，表明TGR5水平与糖代谢紊乱有一定关联，但关于TGR5对心肌细胞损伤的影响研究甚少[5]。自胚胎大鼠心肌获取的H9C2细胞系和原代乳鼠心肌细胞有高度相似性，常用于心血管疾病的基础研究，本研究选择大鼠H9C2心肌细胞进行培养，并分析激活TGR5对高糖、高脂诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及信号转导机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 H9C2心肌细胞1株(武汉博士德微生物公司)，DMEM/F12培养基与多聚赖氨酸(Hyclone公司)，CO2培养箱(Thermo公司)，光学显微镜(Nikon公司)，-80 ℃冰箱(Thermo公司)，细胞培养皿(Costar公司)，低温高速离心机(Thermo公司)，齐墩果酸(Sigma公司)，澳洲胎牛血清(BOVOGEN公司)，葡萄糖(Sigma公司)，棕榈酸(Sigma公司)，Ⅱ型胶原酶(GIBICO公司)，5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Sigma公司)，TGR5 shRNA(上海汉恒生物科技有限公司，慢病毒包装)，核因子E2相关因子2(Nrf2)小干扰RNA分子(siRNA)慢病毒(吉凯基因科技有限公司)，血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉(ZnPP，百灵威有限公司)，SQ22536(美国MCE公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT，Biosharp公司进口分公司)，活性氧荧光探针(DCFH-DA，Sigma公司)，小鼠横纹肌辅肌动蛋白(α-actinin)及免疫组化试剂盒均购自武汉博士德微生物公司，胰酶、蛋白酶抑制剂和蛋白裂解液及BCA蛋白浓度测定试剂盒、4′ ......