陈 愿，赵子明，宋 爽，崔留义，李传荣，杨晓航，沈 蕾，刘乾坤

    动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性炎症性疾病，是多种心血管疾病的主要病理基础[1]。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)是构成血管壁结构的主要细胞成分，同时还参与维持血管张力。VSMC具有低增殖和低迁移的特征，在受到外界刺激后分化为高增殖和迁移特性的分泌型细胞，引发管腔重塑和狭窄，导致AS的发生[2]。因此，降低VSMC向内膜的迁移和增殖是预防和治疗AS的关键。微小RNA(microRNA，miRNA)长度为18～25个核苷酸，参与调控细胞的增殖、凋亡、迁移等生命学过程，在人类心血管疾病的发生发展中发挥重要作用[3-5]。研究已表明，miR-96-5p[6]、miR-3646[7]等多种miRNA在AS疾病中异常表达，参与调控VSMC的增殖和迁移。有报道称，动脉粥样硬化病人血清中miR-148a-5p的表达明显升高[8]，但目前，miR-148a-5p对VSMC增殖和迁移的影响还未见相关报道。本研究通过体外培养人主动脉VSMC，探讨干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)诱导VSMC增殖和迁移的影响，以期为AS的治疗提供新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人主动脉VSMC购自中国科学院上海细胞库，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自浙江天杭生物科技股份有限公司，DMEM培养基、细胞周期检测试剂盒、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(propidium iodide，PI)细胞凋亡试剂盒、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白检测试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司，胰蛋白酶购自美国Sigma公司，逆转录试剂盒和聚合酶链式反应(PCR)试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，miR-148a-5p 模拟物(mimcs)及模拟阴性序列(miR-NC)、miR-148a-5p抑制剂(anti-miR-148a-5p)及抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)购自上海吉玛制药技术有限公司，Trizol试剂和LipofectamineTM 2000试剂盒购自美国Invitrogen公司，PCR引物购自上海生工生物工程有限公司，细胞核增殖抗原Ki67、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ......