单会艳，俞艳华，赵瑞彪

    心肌缺血再灌注损伤是指心肌组织缺血后恢复血流，血液的再灌注加重其结构损伤和功能障碍的病理生理过程，最终可能导致心肌梗死、纤维化、心肌肥厚和心力衰竭等多器官功能障碍[1]。因此，深入研究其发生发展机制，抑制心肌细胞凋亡，对防治心肌缺血再灌注损伤具有重要作用。研究报道，miR-206在低氧诱导的心肌细胞损伤和凋亡过程中发挥了保护心肌细胞的作用[2]。miR-206通过靶向蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B)对急性心肌梗死诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用[3]。miR-206还可通过靶向CC趋化因子配体2(CC motif chemokine ligand 2，CCL2)抑制癫痫发作诱发的脑损伤[4]。S100钙结合蛋白A9(S100 calcium-binding protein A9，S100A9)是S100蛋白家族成员，在小鼠脑缺血再灌注损伤模型中高表达[5]。S100A9是早期再灌注阶段上调最明显的基因，敲除S100A9使心肌细胞凋亡明显减少，并改善心脏功能[6]。S100A9还参与了儿童急性肺损伤[7]。然而miR-206-3p和S100A9对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响还尚未清楚。本实验旨在研究miR-206-3p和S100A9对H/R诱导的心肌细胞损伤的影响，且miR-206-3p是否通过靶向调控S100A9表达影响H/R诱导的心肌细胞损伤。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠心肌细胞H9C2购自美国ATCC公司；胎牛血清、DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司；Trizol试剂、cDNA试剂盒、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)试剂盒均购自日本Takara公司；BCA试剂盒购自上海羽朵生物科技有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)试剂盒均购自上海沪震实业有限公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司；双荧光素酶报告实验试剂盒购自上海英拜生物科技有限公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 H/R细胞模型的建立 将无血清DMEM培养基先置于含95%N2、5%CO2密闭培养箱中3 h，进行缺氧处理，将大鼠心肌细胞H9C2接种于上述培养基中继续缺氧处理3 h ......