魏利娟，马亚飞，陈小莉，郭仲辉，王鹏华

    心肌细胞损伤是引起心血管疾病的重要原因之一，其中，炎症反应引起的心肌细胞凋亡是诱发心肌细胞损伤的重要因素，脂多糖(LPS)属于革兰阴性菌胞壁的重要成分，LPS可促进炎症反应从而加重心肌细胞损伤，因此，如何减轻心肌细胞损伤成为治疗心血管疾病的关键[1]。右美托咪定可抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导的炎症反应，保护心肌细胞免受缺氧/复氧损伤[2-3]。但相关麻醉药物对心肌细胞损伤的作用机制尚未完全阐明。布托啡诺是人工合成的一种阿片受体激动剂，其可激活心肌阿片受体从而保护心肌细胞。研究表明，布托啡诺通过抑制线粒体介导的细胞凋亡而减轻心肌缺血再灌注损伤[4]。微小RNA(miRNA)在LPS诱导的心肌细胞中可发挥重要调控作用。研究发现，黄芪多糖通过调节miR-127表达而减轻LPS诱导的心肌细胞炎症损伤[5]。但布托啡诺是否可通过调控某些miRNA表达从而发挥作用尚未阐明。微小RNA-665(miR-665)在心肌缺血再灌注损伤中表达水平升高，敲低其表达可激活p21激活激酶-1(PAK1)/蛋白激酶B(Akt)信号通路，从而减轻心肌细胞损伤[6]。但布托啡诺是否通过调控miR-665的表达影响LPS致心肌细胞炎症反应和细胞凋亡尚未可知。因此，本研究采用LPS诱导心肌细胞建立细胞损伤模型，探讨布托啡诺是否可通过调控miR-665的表达从而参与LPS诱导的心肌细胞炎症反应及凋亡过程，并探究其可能作用机制，为进一步阐明布托啡诺治疗心血管疾病的分子机制奠定实验基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 布托啡诺购自江苏恒瑞医药股份有限公司；大鼠心肌细胞H9C2购自上海钰博生物科技有限公司；LPS购自上海沪鼎生物科技有限公司；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)检测试剂盒购自上海泽叶生物科技有限公司；DMEM、胎牛血清购自美国Gibco公司；Lipofectamine2000、Trizol试剂、反转录与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法细胞凋亡检测试剂盒购自上海瑞楚生物科技有限公司；anti-miR-NC、anti-miR-665、miR-NC、miR-665 mimics购自广州锐博生物技术有限公司；兔抗鼠Bcl-2、Bax抗体购自美国Santa Cruz公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购自美国Abcam公司 ......