黄 宇，赵汉君，苏立杰，陈 婕，阮小芬，姚轶立，王肖龙，薛金贵

    近年来，随着人口高龄化和经济的发展，动脉粥样硬化(AS)所致的心血管疾病(atherosclerotic cardiovasculardisease，ASCVD)死亡率及发病率逐步升高[1]，亟须深入阐明其发病机制进而优化治疗措施。AS产生机制复杂，但目前普遍认为与内皮细胞损伤、炎症反应等相关[2-5]。中医药具有作用多靶点、多途径且安全有效的优势，越来越被临床重视。益气活血化痰方(黄连9 g，生黄芪30 g，丹参20 g，水蛭12 g，全瓜蒌15 g)为本院治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的经验方，经过15年的临床应用，疗效显著。近年来课题组研究发现，益气活血化痰方抗AS作用可能与其改善内皮功能、减轻炎症反应等机制有关，但其具体机制需要进一步研究。本研究通过细胞实验和生物信息学方法，验证巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2信号通路，探寻益气活血化痰方抗AS可能的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 无血清培养基(GIBCO，31800022)，磷酸缓冲盐溶液(PBS)、胎牛血清(FBS)购自南京拜睿生物科技有限公司，培养板、培养皿(Corning)，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)由北京协和医科大学提供，CD63、CD81、β-actin、TAB2(ABcam)，台盼蓝、结晶紫、胰酶、钨磷酸(Sigma)，96孔板、6孔板(AXYgen)，转染试剂盒、2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)蛋白浓度测定试剂盒、免疫沉淀(IP)细胞裂解液均购自上海碧云天生物技术有限公司，miR-28-3p mimic、miR-28-3p NC购自吉凯基因，Luria-Bertani(LB)固体培养基(Solarbio，L1015)，LB液体培养基(Solarbio，L1010)，甲醇(MP)，十二烷基硫酸钠(SDS，Bio-Rad，161-0302)，凝胶前体(AP，Bio-Rad，161-0700)，甘氨酸(Tris，Bio-Rad，161-0719)，聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Millipore)，脱脂奶粉(伊利)，ECL化学发光试剂盒(生物工程有限公司)，无水乙醇、氯仿、异丙醇购自国药集团化学试剂有限公司，胎牛血清(GIBCO，10270-106)，焦碳酸二乙酯(Sigma)，实验无特定病原体(SPF)级雄性ApoE-/-小鼠(8周龄，体重20～25 g，所有小鼠提前饲养7 d以适应)。

    1.2 仪器 超净工作台(苏州净化 ......