张高炼，郭建辉，曾 敬，李 敏，陈 锐，张晓宁，刘姗姗，梁韡斌

    癫痫是由于大脑神经元异常放电进而引起大脑功能障碍的一种慢性疾病，流行病学研究资料显示，癫痫在发达国家的中位发病率约为45/10万，而在中低收入国家约为50.4/10万。据统计显示，发达国家癫痫病人的无故单次或多次癫痫发作发生率达到了50/10万～70/10万，在贫穷国家这一比例可能会更高。目前，我国的癫痫发病率与发达国家癫痫发病率基本保持一致。 研究发现，癫痫的发病机制与头部肿瘤、颅脑外伤、遗传因素等相关，且随着疾病进展，癫痫不仅危害病人生命安全，影响病人精神状态，还会导致病人发生认知功能障碍[1]，在儿童病人的临床表现中，癫痫对认知功能的影响则表现的更为明显。研究证实，癫痫导致的认知功能障碍及疾病进展与海马组织神经元损伤密切相关[2]。近年来不断有学者报道，反转录富含半胱氨酸蛋白(RECK)/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/蛋白激酶B(AKT)通路与颅脑损伤、抑郁及癫痫等脑部神经细胞受损疾病的预后转归及恶化进展均密切相关[3]。有研究发现，RECK/GFAP/AKT通路与海马组织细胞功能及神经元正常生理、生命活动密切相关[4-5]。本研究初步研究草果知母汤对戊四唑诱导的癫痫大鼠海马神经元的保护作用及RECK/GFAP/AKT信号通路的调节作用，为草果知母汤在癫痫疾病中的应用提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 90只雄性SD大鼠，无特定病原体(SPF)级，8周龄，体质量180～200 g，购自广西医科大学实验动物中心。

    1.2 药品与试剂 草果知母汤由中药饮片(草果4.5 g，知母6 g，半夏9 g，厚朴6 g，黄芩4.5 g，乌梅4.5 g，花粉4.5 g，姜汁25 mL)煎制而成，生药含量为1 g/mL，购自北京同仁堂药业；丙戊酸钠(山东方明药业集团股份有限公司)；戊四唑(上海超研生物科技有限公司)；尼氏染色液(上海恒斐生物科技有限公司)；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)凋亡检测试剂盒(广州捷威斯生物科技有限公司)；聚合酶链式反应(PCR)引物设计及合成(上海信帆生物科技有限公司)；RECK抗体(亚科因生物技术有限公司)；GFAP(普健生物科技公司)；磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、AKT购自碧云天生物科技有限公司。

    1.3 主要仪器 DMi8-M荧光倒置显微镜(徕卡显微系统贸易有限公司)；Sigma 3-18KS离心机(德国SIGMA公司)；SpectraMax iD3酶标仪(美谷分子仪器有限公司)；E-Gel Imager凝胶成像仪(赛默飞世尔科技公司)；S700/S700A石蜡切片机(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；KEEBIO-VE186双垂直电泳槽(上海金鹏分析仪器有限公司) ......