韩 杰，李廷荃，李子娟，王雁彬，霍 凯

    下肢动脉硬化闭塞症(arteriosclerosis obliterans of the lower extremities，ASOLE)是临床上常见的一种周围血管疾病，由于动脉硬化造成内膜增厚、管腔狭窄闭塞，导致相应区域供血不足，甚至引起肢体末端坏疽，导致截肢[1-2]。前期研究表明，鹿茸能够促进下肢动脉硬化闭塞大鼠血管新生、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)增殖及促血管生成相关因子升高[3]，但具体机制尚未明确。磷脂酰肌醇3-羟基激酶(PI3K)是蛋白激酶B(Akt)的上游信号分子，可激活Akt来调节细胞内信号通路和细胞功能的变化，在血管新生中发挥着重要作用[4-5]。本实验以下肢动脉硬化闭塞症大鼠为模型，通过检测CD133+细胞比例、血清血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1α含量以及腓肠肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、趋化因子受体4(CXCR4)阳性表达来研究鹿茸通过PI3K/Akt信号通路促进血管新生及细胞迁移的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠80只，2月龄，体质量250～300 g，由山西省中医药研究院提供，实验动物质量合格证号：1103221911003889。

    1.2 饲料制备 高脂饲料，含80.3%基础饲料、15%猪油、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、4%胆固醇。

    1.3 药物与试剂 鹿茸采用马鹿茸，购自北京同仁堂(集团)有限责任公司，用普通粉碎机制成粗粉，再用气流超微粉碎机制成微粉(粒径小于10 μm)，温水调，搅拌均匀，即用即配。PI3K抑制剂LY294002购于美国Selleck公司中国分公司(美国辉瑞公司授权经销商)，用二甲基亚砜(DMSO)配制母液(10 mg LY294002溶于6.507 5 mL DMSO中)于-20 ℃冰箱保存，每日配制当日所需工作液(10%母液+40%PEG300+5%Tween-80+45%氯化钠溶液)，即用即配；维生素D3针剂(哈尔滨摩天农科兽药有限责任公司，批号：20190318)；CD133抗体、CD133同型对照抗体(BD公司，批号：751261)；VEGF酶联免疫吸附实验(ELISA)测定试剂盒(Elabscience，货号：E-EL-R2603c)、SDF-1α ELISA试剂盒(Elabscience，货号：E-EL-R2495c)；CXCR4、eNOS抗体(Abcam公司)；PI3K、Akt抗体(Abcam公司) ......