辅酶Q10对冠心病心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响
线粒体,1材料与方法,2结果,3讨论
伊加提·司马义,帕合热丁·努尔麦麦提,阿布都乃比·麦麦提艾力冠心病是指由冠状动脉血管发生粥样硬化所引起的血管狭窄、阻塞,从而造成心肌缺血、缺氧甚至坏死的心脏疾病,是临床上常见的心血管疾病[1]。心肌缺血再灌注损伤是冠心病病人围术期常见的临床并发症之一。心肌缺血再灌注损伤的发生不仅可影响再灌注的治疗效果,还可加剧脉管病变,甚至诱发恶性心律失常、心源性猝死,严重威胁病人生命安全[2]。辅酶Q10(CoQ10)是一种类似维生素的脂溶性物质,广泛存在于大多数细胞膜的磷脂双层的疏水内部[3]。研究显示,辅酶Q10主要通过增强相关线粒体活性,参与线粒体呼吸链作用,在三磷酸腺苷(ATP)合成中扮演着重要角色[4]。另有文献表明,辅酶Q10还可参与活性氧的清除,发挥脂质过氧化抑制作用,从而参与氧化应激的调节[5]。近年来,随着临床研究对CoQ10认识的不断深入,辅酶Q10被广泛用于各种心血管疾病的治疗,但其在冠心病心肌缺血再灌注损伤中的作用机制尚未阐明。本研究拟构建冠心病大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,探究辅酶Q10对冠心病大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡的影响,进一步明确其对心肌细胞的保护作用及机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 30只成年无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠,体质量(200±20)g,均购于广东省动物实验中心。所有实验动物均于生物安全实验室分笼饲养,自由饮食饮水,保持室内安静、通风,12 h间隔照明,室温(20±2)℃,相对湿度(50±5)%。所有动物实验均经伦理委员会批准。
1.2 主要试剂 辅酶Q10(国药准字H46020107,海南卓泰);二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒(美国Invitrogen公司);实时荧光定量逆转录试剂盒、实时荧光定量 PCR试剂盒(TaKaRa公司);兔抗鼠β-actin单克隆抗体、兔抗鼠B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)单克隆抗体、兔抗鼠Bcl-2相关X蛋白(Bax)单克隆抗体、兔抗鼠天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)单克隆抗体(Abcam公司);原位末端标记法(TUNEL)试剂盒(美国Roche公司);磷酸盐缓冲液(PBS)、蛋白上样缓冲液(中国上海碧云天生物工程研究所)。
1.3 方法
1.3.1 动物分组与模型构建 采用高脂饮食饲养联合腹腔注射垂体后叶素构建大鼠冠心病模型:每日高脂饮食连续饲养6周后,间隔24 h给予腹腔注射垂体后叶素30 μg/kg,连续3次。所有实验大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+辅酶Q10干预组(CoQ10组) ......
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