基于Akt/eNOS通路探讨延胡索乙素对缺氧/复氧诱导的心脏微血管内皮细胞损伤的保护作用
氧化应激,剂量,1材料与方法,2结果,3讨论
马新豫,关玲霞,张国坡恢复冠状动脉血流是临床治疗缺血性心脏病的常用手段,但血流灌注后易诱发新的心脏损伤,这一现象称为心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)[1]。MIRI中最先受累部位是心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs),内皮细胞损伤被认为是触发MIRI的重要因素[2-3]。因此,寻找有效减轻和改善CMECs损伤的措施对治疗MIRI具有重要意义。延胡索乙素是中草药延胡索的有效成分之一,多用于临床镇痛和镇静[4]。有研究指出,延胡索乙素可通过抑制氧化应激和钙敏感受体/磷脂酶C-γ1途径减轻大鼠肺血管内皮细胞凋亡,实现对内皮细胞损伤的保护[5],但其对CMECs损伤的作用报道鲜见。既往研究显示,激活蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路是延胡索乙素发挥保护MIRI的重要机制[6];而Akt/eNOS通路活化异常与CMECs损伤密切相关[7]。本研究旨在探讨胡索乙素对缺氧(hypoxia,H)/复氧(reoxygenation,R)所致CMECs损伤的影响,为延胡索乙素保护MIRI提供新的参考依据。
1 材料与方法
1.1 主要材料 细胞:大鼠CMECs,购自武汉普诺赛生命科技有限公司,货号:CP-R135,使用专用培养基置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。
试剂:CMECs专用培养基(武汉普诺赛生命科技有限公司,货号:CM-R135);乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测试剂盒和大鼠白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定试剂盒(北京索莱宝生物科技有限公司,货号:BC0685,BC0170,BC0025 ......
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