吴华兵

    缺血性心脏病是心血管疾病死亡的主要原因之一，占全部心脏病死亡的50%左右。心肌缺血/缺氧是心脏不能正常工作的一种病理状态，由心脏血流灌注减少，导致供氧减少，使得心肌能量代谢异常所致[1-2]。目前，缺血性心脏病的主要治疗手段是血流再灌注，而研究表明，血流再灌注治疗可导致心肌出现血流再灌注损伤，主要表现为心肌细胞氧化应激损伤，损害心脏功能[3]。因此，探寻有效的预防心肌再灌注损伤的药物是临床研究热点。右美托咪定是一种α2-肾上腺素受体激动剂，研究显示，其对心肌具有保护作用[4]。罗敏等[5]研究显示，右美托咪定可抑制心肌缺血再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡，减少心肌梗死面积，进而缓解心肌损伤。邹田田等[6]研究显示，右美托咪定可通过稳定线粒体膜电位抑制高糖诱导的心肌H9C2细胞线粒体损伤及细胞凋亡。线粒体自噬是细胞清除受损线粒体的过程，研究表明，线粒体自噬功能障碍与心肌缺血再灌注氧化应激损伤有关[7]。目前，有关右美托咪定减轻心肌缺血再灌注损伤的机制尚未明确，因此，本研究以右美托咪定干预缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)条件下的心肌细胞，观察其对心肌细胞内线粒体自噬的影响，为明确右美托咪定的心肌保护作用提供一定参考。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料与仪器 大鼠心肌细胞系H9C2细胞株(bio-73030)购自北京百欧博伟生物技术有限公司；DMEM培养基(CDLG-3719)、3-2(4，5-二甲基噻唑-2)-2-四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司；JC-1荧光探针线粒体膜电位检测试剂盒(J8030)、超氧化物歧化酶(superoxide orgotein dismutase，SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量检测试剂盒均购自南京建成生物研究所；活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量测定试剂盒购自上海前尘生物科技有限公司；蛋白提取试剂盒(BC3710-100T)购自上海吉至生化科技有限公司；兔抗微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)抗体(H00008650-A01)、PTEN诱导激酶1(PTEN induced kinase 1，PINK1)抗体(FNab09992)、E3泛素连接酶(E3 ubiquitin ligase，Parkin)抗体(bs-1865R)、β-actin抗体(ATA40114)、山羊抗兔HRP(SE12-0.1)二抗均购自北京索莱宝科技有限公司 ......