刘 青

    氧化应激在心肌缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、心力衰竭、糖尿病性心肌病等多种心血管疾病的发病机制中发挥着重要作用[1]。氧化应激导致活性氧过量产生，过量的活性氧破坏机体氧化-抗氧化平衡系统，对心肌细胞造成损伤；氧化应激增强导致线粒体功能障碍，激活心脏凋亡信号通路，进一步加重心肌损伤[2]。因此，减轻心肌细胞氧化应激和/或直接抑制凋亡可能是一种有效的心脏保护策略。草苁蓉多糖是我国传统中药草苁蓉的活性成分，具有抗氧化、抗肿瘤、免疫增强、保肝等作用[3]。相关研究证实，草苁蓉多糖通过抗凋亡、抗氧化应激作用可缓解四氯化碳所致肝损伤和过氧化氢所致内皮细胞损伤[4-5]。关于草苁蓉多糖对心肌细胞保护作用的研究报道较少。微小RNA(miRNA)定义为长度约20 nt的非编码RNA，通过直接结合mRNA的3′非翻译区(3′UTR)抑制翻译或降解mRNA，参与调控细胞存活、细胞凋亡等生物过程。有研究显示，miR-138-5p在不稳定型心绞痛中下调，过表达miR-138-5p可提高缺氧复氧心肌细胞活力，抑制细胞凋亡[6]。然而，miR-138-5p在心肌细胞氧化损伤中的作用尚未完全明确。本研究以H2O2诱导H9c2心肌细胞建立氧化损伤模型[7]，探讨草苁蓉多糖对H2O2所致心肌细胞凋亡、氧化应激损伤的影响，并以miR-138-5p为切入点探讨其保护作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 大鼠H9c2心肌细胞(中国典型培养物保藏中心)；DMEM/F12培养基、青链霉素双抗、胎牛血清(武汉普诺赛生物公司)；细胞计数试剂盒8(CCK-8)、miRNA反转录试剂盒、miRNA荧光定量检测试剂盒(北京百奥莱博生物公司)；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡检测试剂盒、5×蛋白上样缓冲液、化学发光试剂(上海碧云天生物公司)；兔源白细胞淋巴瘤(Bcl)-2、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、Bcl相关X蛋白(Bax)抗体，羊抗兔IgG二抗(美国Abcam公司)；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒(北京索莱宝生物科技公司)。

    1.2 方法 每组设置3个复孔，实验重复3次，

    1.2.1 细胞培养和实验分组 H9c2心肌细胞复苏后 ......