陈耿仟，吴国平，洪丽明，林 润

    心血管疾病，如心力衰竭、冠心病和急性心肌梗死等与心肌结构和功能失调密切相关，严重威胁人类生命安全[1]。溶栓、冠状动脉介入是治疗心血管疾病的有效手段，可使病人受到不同程度的心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤[2]。因此，开发新策略预防I/R损伤对改善心血管疾病具有重要的临床意义[3]。miR-19a在糖尿病诱导的心肌组织中过表达，可能参与糖尿病心肌损伤过程。Liu等[4]研究显示，激活细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)可抑制蛋白质酪氨酸激酶-1(JAK1)及转录活化蛋白3(STAT3)磷酸化水平，抑制SOCS3表达可抑制肝癌细胞自噬。有研究显示，I/R导致心肌细胞过度自噬，抑制I/R诱导的心肌细胞自噬，进而保护心脏功能[5]。miR-19能否参与调控缺氧(hypoxia，H)和复氧(reoxygenation，R)诱导的心肌细胞自噬过程及其与SOCS3/JAK1/STAT3通路的关系尚未明确。本研究在体外模拟H/R模型[6]，探讨miR-19a过表达对H/R诱导下心肌细胞增殖、凋亡及自噬变化情况，并分析潜在的作用机制，为预防心肌细胞I/R损伤提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料与仪器

    1.1.1 实验材料 大鼠心肌细胞H9c2(GNR5)购自中国科学院细胞库；DMEM高糖(11995)/无糖(90113)培养基、优级胎牛血清(11011-8611)、胰蛋白酶消化液(0.25%)(T1350)、双抗(青链霉素混合液)(P1400)、Matrigel基底胶(M8370)、逆转录试剂盒(T2210-200T)、电化学发光(ECL)液(PE0010)购自北京Solarbio公司；miR-19a模拟(mimics)、miR-19a阴性对照(negative control，NC)由广州锐博生物科技有限公司设计；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide，Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒(C1062M)、RIPA裂解液(P0013B)、Trizol试剂盒(R0016)、细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8，CCK-8)(C0037)上海碧云天生物技术有限公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒(11668019)、磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde phosphate Dehydrogenase ......