姬寒蕊，吴圣贤

    高脂血症是指由于脂肪代谢或运转异常而使血液中脂质水平异常的一种疾病。近年来，随着膳食结构的改变和社会老龄化的加速，高脂血症已成为动脉粥样硬化、缺血性脑卒中、急性心肌梗死等疾病的主要危险因素，可直接或间接地导致以上疾病发生或加重，提高其致残率及死亡率，积极探究血脂代谢紊乱的调控机制十分必要。近年来，发现了一类天然存在的非编码RNA，称为microRNA(miRNA)，miRNA为脂质代谢的关键调节因子[1-2]，在调节血脂代谢和动脉粥样硬化发展进程中具有关键作用，探究miRNA表达与血脂代谢的关系，对于防治高脂血症具有重要意义。

    1 材料与方法

    1.1 动物模型的建立 实验选用C57BL/6J雄性小鼠建立高脂饮食诱导的高脂血症模型，将90只小鼠随机分为两组，即4 ℃冷暴露组和30 ℃等热区对照组，每组45只。4 ℃冷暴露组常温下饲养4周后转入18 ℃环境饲养箱内适应性饲养1周后，转入4 ℃环境饲养箱内饲养4周；30 ℃等热区对照组结束常温饲养4周后直接转入30 ℃环境饲养箱内饲养5周。高脂饮食配方为15%脂肪、0.25%胆固醇，12 h/12 h光/暗循环。

    本实验中所有动物饲养条件以及动物实验操作均严格遵守医院重点学科实验室动物实验伦理委员会制定的相关规定。

    1.2 血脂水平检测 取200～300 μL小鼠血清，应用全自动生化分析仪检测血脂四项，即总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

    1.3 病理学检测 取出固定于4%多聚甲醛中的脂肪组织，清洗切块后放置于石蜡组织包埋盒中，盒外标记信息。包埋盒置于自动脱水石蜡组织制备仪中脱水、过夜，切片机切片，40 ℃温水台中使切片舒展开，将水控干后烤片，常温干燥环境中保存以备用。取小鼠脂肪组织的石蜡包埋切片，进行常规免疫组织化学染色和苏木精-伊红(HE)染色，免疫组化一抗使用兔抗线粒体解偶联蛋白1(UCP1)抗体(货号AB-10983)，购自Abcam公司，二抗为兔二步法检测试剂盒(货号PV-9001)，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。中性树胶封片后，光学显微镜下观察并摄片。观察小鼠肩胛区、腹股沟区、附睾区脂肪组织HE染色情况，比较各部位脂肪组织细胞面积大小、数目、小房室形成情况；并分析各部位脂肪组织棕色化标志物UCP1免疫组化阳性染色面积。

    1.4 二代测序及初步分析 使用Trizol法进行血清外泌体RNA提取和纯化 ......