王建湘，廖 杨，易 琼，陈新宇

    动脉粥样硬化(AS)发病机制的研究一直是热点，目前的研究认为动脉粥样硬化是一种慢性炎症和自身免疫性疾病[1-2], 炎症是致动脉粥样硬化发病的中介和中心环节[3]。核转录因子-κB(NF-κB)是一种公认的炎症细胞信号传导转录蛋白[4]，血管内皮细胞受损的始发机制就是缘于NF-κB的激活[5-6]，通过NF-κB的转录激活可促进细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]、黏附分子[细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)]等基因的表达[7-9]，也就是说动脉粥样硬化的发生及发展主要通过NF-κB调控炎症介质基因的转录来实现[10-11]，NF-κB已经成为炎性疾病新的治疗靶点[12-13]。柴胡陷胸汤是由小柴胡汤与小陷胸汤二方加减而成的中医经典名方，既往开展的临床实践亦证实该方对冠心病心绞痛具有较好的治疗作用[14-15]。本研究拟通过高脂血清诱导人脐静脉内皮细胞株(ECV304)细胞损伤建立模型，探讨柴胡陷胸汤对细胞损伤时 NF-κB炎性信号通路相关因子蛋白和基因表达的影响，以阐明其抗动脉粥样硬化的作用机制，从而为其临床防治动脉粥样硬化疾病提供新的理论和实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株传代培养 ECV304购自中国科学院上海细胞所，首先在含10%胎牛血清的DMEM 培养基中将细胞株复苏培养，再在37 ℃、5%CO2恒温培养箱中培养传代。

    1.2 主要试剂与仪器 胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM培养基均购自美国Sigma 公司，四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)试剂盒、蛋白提取试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)试剂盒均购自上海碧云天公司；人TNF-α购自上海酶联生物科技有限公司；聚合酶链式反应(PCR)引物由上海Gene Pharma合成；TRIzol RNA分离试剂及实时定量PCR(RT-PCR)试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific(中国)公司；兔抗人NF-κBp65、ICAM-1、VCAM-1、β-actin、山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)H&L辣根过氧化物酶(HRP)均购自英国Abcam公司；细胞培养箱购自美国Thermo Scientific公司，iMark680多功能酶标仪、蛋白转膜装置、Power PacTM 基础电泳仪、GC-800光密度扫描仪、ChemiDoc TMMP成像系统均购自美国Bio-Rad公司。

    1.3 含药血清和高脂血清的制备 柴胡陷胸汤组方：柴胡10 g ......