梁韡斌，张高炼，郭建辉，曾 敬，李 敏，陈 锐，张晓宁，刘姗姗

    癫痫作为一种常见的脑部功能障碍疾病，其在我国总体发病率高达0.7%，且1年内癫痫病人发作率为0.45%[1-2]，然而由于癫痫的发病机制复杂多样，临床上对于癫痫的治疗药物有限且有效率低，所以加速抗癫痫药物研发对于改善癫痫病人生活质量具有重要意义。近年来，研究发现癫痫导致的认知功能障碍与Kelch-样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路介导的海马神经元细胞铁死亡机制关系密切，且通过调节Keap1/GPX4/Nrf2/HO-1通路蛋白进而抑制海马神经元细胞死亡成为癫痫治疗的新方法[3-4]。草果知母汤作为一种中药成方制剂，其以中医理论为指导，具有燥湿清热之功效，现代医学研究发现其对癫痫具有显著的改善作用[5]。本实验通过研究草果知母汤对癫痫大鼠的改善作用及对Keap1/GPX4/Nrf2/HO-1通路的调节作用，为草果知母汤的药理作用研究提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 无特定病原体(SPF)级6周龄雄性Wistar大鼠60只，体质量180～200 g，购自广西医科大学实验动物中心，实验动物合格证号：SCXK桂2009-0002，实验动物使用许可证：SYKG桂2009-2005。本实验遵守了广西中医药大学实验动物管理与保护的有关准则。

    1.1.2 主要试剂 中药草果知母汤(草果10 g，知母10 g，厚朴10 g，半夏10 g，黄芩10 g，甘草10 g，由广西中医药大学第一附属医院研制，批号：20150108，制备方法：将中药饮片加水回流提取2次，第1次加10倍水提取2 h，第2次加8倍水提取1.5 h，药液过滤、合并浓缩至含生药浓度1 g/mL)。戊四氮(PTZ)购于美国Sigma公司(货号10106150)；丙戊酸钠(批号201806121，赛诺菲制药有限公司生产)；GPX4兔多克隆抗体(货号AF7020)、Keap1兔多克隆抗体(货号AF7335)、HO-1兔单克隆抗体(货号AF1333)、Nrf2(货号AF7623)兔多克隆抗体均购自碧云天生物科技公司；电化学发光(ECL)Plus超敏发光液(货号PE0010)、苏木精-伊红(HE)染色试剂盒(货号G1120)、尼氏(Nissl)染色液(货号G1434)、总RNA提取试剂盒(货号R1200)、cDNA逆转录试剂盒(货号T2240)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(货号A0208)购自北京索莱宝科技有限公司；谷胱甘肽(GSH)(货号ARB10949)及活性氧(ROS)(货号ARB14150)检测试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司；铁含量检测试剂盒(货号MBC4350)购自北京麦瑞博生物科技有限公司 ......