陈辰博，赵吉锐，唐美秀，刘建和，，李 亮

    心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)现象在临床较为常见，理论上缺血区域的血供可恢复，但引发的心肌缺血/再灌注损伤可继发性导致急性心力衰竭、脑功能障碍、胃肠功能障碍、全身炎症反应综合征[1-2]。重者出现多器官功能障碍综合征，危及病人生命，因此，心肌缺血/再灌注损伤研究一直为基础和临床研究的热点。心肌缺血/再灌注损伤伴发脓毒症病人因全身炎性反应综合征被激发，心脏发生不可逆的功能障碍且进行性加重，治疗难度相对较大，采取科学、规范的方法维持再灌注能有效改善心肌功能，降低临床病死率[3]。检索国内外研究，关于再灌注条件参数设置的研究相对较多，但关于再灌注温度调控对心肌影响机制的论述偏少[4-5]。本研究探讨温度调控线粒体自噬活性，继而影响心肌缺血/再灌注合并脓毒症大鼠的内在机制，为再灌注相关技术及条件设置提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠45只，体质量253～287 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司(许可证编号：SYXK湘2021-0003)。饲养环境：温度20～25 ℃，湿度50%～55%，昼/夜交替(均为12 h)，自由饮水和进食，适应性喂养7 d开始实验。分为健康组(9只)和模型组(36只)，健康组正常饲养，模型组先后制作脓毒症模型和心肌缺血模型。本动物实验遵循相关规定，在长沙医学院重点实验室备案。

    1.2 试剂仪器

    1.2.1 主要试剂 丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)分析试剂盒[西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司]；白细胞介素-1β(IL-1β)的酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测试剂盒[Abcam 公司、沃卡威(北京)生物技术有限公司]；肌酸激酶同工酶(CK-MB)试剂盒(上海乔羽生物科技有限公司)；乳酸脱氢酶(LDH)活力检测试剂盒(上海信帆生物科技有限公司)；血管内皮生长因子(VEGF)测定试剂盒(深圳市科润达生物工程有限公司)；血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)和半胱天冬氨酸蛋白酶-2(Caspase-2)ELISA检测试剂盒购自上海沪震生物科技有限公司；IκB激酶β(IKKβ)测定试剂盒(上海梵态生物科技有限公司)；Na+-K+-ATP酶ELISA试剂盒(泉州市睿信生物科技有限公司)；大鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA试剂盒(上海臻科生物科技有限公司)；辅酶Q细胞色素C还原酶ELISA试剂盒[今品化学技术(上海)有限公司]；NADH-辅酶Q还原酶ELISA试剂盒[卡迈舒(上海)生物科技有限公司]；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量法测定试剂盒[上海碧云天生物技术有限公司]等 ......