邱伯雍,魏易洪,苑素云,毛美娇,曹 敏,周 端,邓 兵,沈 琳

    参蛤散是中医经典方剂,本课题组在前期研究中发现该方可以改善心功能[1]、舒张主动脉[2]、减轻心肌氧化应激[3],并能保护心脏线粒体功能[4]。在临床试验和动物实验等方面均证实了参蛤散具有很好的抗心力衰竭作用[5]。但在细胞研究水平,目前尚未见参蛤散相关的较多报道。H9c2 心肌细胞是常用的心肌细胞株,多用于药理及信号通路机制等研究。本实验拟采用H9c2 心肌细胞为研究对象,同时制备参蛤散冻干粉进行干预,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞吸光度值(OD 值),细胞划痕实验检测细胞迁移率,探讨参蛤散对H9c2 心肌细胞增殖的作用,为后续进一步研究参蛤散的药效及药理机制作铺垫。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 大鼠心肌细胞(H9c2)购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

    1.2 药物与试剂 人参购自上海上药神象健康药业公司(批号:180702);蛤蚧购自上海雷允上药业西区有限公司(批号:190812)。参蛤散冻干粉制备:蛤蚧去头足,加入3 倍蛤蚧质量的人参,再加入5 倍干药质量的一级纯水,煎煮2 遍,过滤药液后浓缩。浓缩液装入冻干机中制备冻干粉,加入等重DMEM 配成参蛤散冻干粉溶液,用0.22μm 微孔滤膜(MILLEXGP)过滤,配成1 g/mL的母液,置于-20 ℃冰箱保存。CCK-8 购自上海碧云天生物技术有限公司。

    1.3 实验仪器 LGJ-10D 冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂有限公司);多功能酶标仪(美国Thermo 公司);ECLIPSE Ti2 TI-E 倒置式荧光显微镜(日本尼康公司);37 ℃培养箱(德国Heraues 公司) ......