程炜婷，张 婷，金秋硕，马 喆，吴爱明，薛程元，高永红，聂 波，赵明镜，娄利霞

    心力衰竭(heart failure，HF)是各类心血管疾病发展的终末阶段和主要死因，具有发病率高、病死率高的特点。心力衰竭时，心肌细胞缺血、缺氧，线粒体结构和功能发生改变，可导致心肌细胞能量代谢紊乱，引起心肌代谢重构和最终细胞死亡[1]。线粒体内质网膜(mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane，MAM)是内质网与线粒体间的结构耦联，在钙(Ca2+)信号传导、脂质运输、能量代谢和细胞存活中起着关键作用。新近研究证实MAM结构在心力衰竭的病理过程中发挥尤为重要的作用[2]。心力衰竭属于中医学“胸痹”“心悸”等范畴。《素问·逆调论篇 》：“若心气虚衰，可见喘息持续不已”，由此认为心气虚是心力衰竭的内因，是病理基础。故补益心气是心力衰竭治疗的治本之法。黄芪为临床常用的益气药，在用益气法治疗心力衰竭过程中发挥着重要作用[3]。本研究采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9c2细胞凋亡模型，通过黄芪注射液干预，探讨黄芪注射液是否通过调节MAM结构蛋白电压依赖性阴离子通道1(voltage-dependent anion channel 1，VDAC1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2，Mfn2)及分子伴侣葡萄糖调节蛋白75(glucose regulated protein 75，GRP75)的表达来抑制AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 大鼠H9c2心肌细胞系购自中国医学科学院基础医学研究所国家实验细胞资源共享服务平台；DMEM培养基、胎牛血清以及胰蛋白酶购自美国Gibco公司；AngⅡ(ANGT-003)购自中国杭州中肽生化有限公司；黄芪注射液(国药准字Z13020999)购自神威药业集团有限公司；细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测试剂盒(CK04)购自北京索莱宝科技有限公司；Trizol购自美国Invitrogen公司；动物组织RNA提取试剂盒(DP431)、反转录试剂盒(K1622)、扩增试剂盒(FP205-02)购自北京天根生化科技有限公司，所用引物由北京诺赛基因组研究中心有限公司合成；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(10149-1-AP)、Mfn2抗体(12186-1-Ap)购自美国Proteintech公司；VDAC1抗体(Ab14734)、GRP75抗体(Ab2799)购自美国Abcam公司；全蛋白提取试剂盒(KGP250)与二喹啉甲酸(BCA)蛋白含量检测试剂盒(KGP902)购自江苏凯基技术生物有限公司；羊抗兔(A0208)、羊抗小鼠(A0216)、Fura-2AM试剂盒(S1052)购于上海碧云天生物技术有限公司；FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I(556547)购自美国BD公司 ......