李华晓，麦浩坚，宋同均，王士强，黎志迪，陈小凤

    癫痫是由大脑某特定区域神经元过度放电引发的一种常见慢性神经系统疾病，其典型临床特征是反复的局部或全身性肌肉痉挛、抽搐和意识障碍，影响着全球数千万人的健康和生活质量[1-2]。尽管已有大量关于癫痫发生机制的研究，但其详细发生机制至今仍未阐明。自噬作为一种高度保守的降解过程已被发现与癫痫的发生密切相关，高度自噬是大脑神经元死亡的一大诱因，而神经元死亡是造成癫痫发生的一个重要因素[3]。因此，抑制神经元过度自噬可能对癫痫的治疗具有重要意义，有必要对癫痫过程中自噬的发生及抑制机制进行探究。长链非编码RNA(long non-coding RNAs，LncRNA)作为一种长度大于200 nt的非编码核糖核苷酸，可参与调控基因表达，近年来有研究发现其参与癫痫、脑梗死等神经系统疾病的发生[4]。LncRNA H19是最早发现的LncRNA之一，在癫痫中明显上调，并且参与细胞增殖、炎症反应等癫痫发生的多个方面[5-6]。研究表明，H19过表达会加剧颞叶癫痫模型大鼠海马神经元凋亡，而抑制其表达可保护细胞损伤[7]。磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/serine/threonine protein kinase B，PI3K/Akt)通路参与癫痫的发生，其激活不仅有助于成人中枢神经元的再生[8]，还可以抑制星形胶质细胞自噬，从而改善癫痫[9]。还有研究发现，在缺血再灌注小鼠脑组织中LncRNA H19表达上调，其可通过抑制PI3K/Akt通路增加脑损伤[10]。本研究探讨LncRNA H19是否可同样通过调控PI3K/Akt通路影响癫痫大鼠海马神经细胞自噬，以期对癫痫的自噬及治疗机制研究提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 50只无特定病原体(SPF)级SD大鼠(体质量235～280 g)，购自中山大学(实验动物中心东校区)，许可证：SCXK(粤)2016-0029，适应性饲养1周(12 h明暗交替)，适应期内采食、饮水自由，试验前禁食12 h。

    1.2 主要试剂 苏木精-伊红(HE)染色试剂盒、反转录试剂盒(货号：AR1180-100、RP1105)购自上海恒斐生物科技有限公司；实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)试剂盒(货号：QPG-050～QPG-052)购自上海吉玛制药技术有限公司；总蛋白提取试剂盒(货号：SD-001/SN-002)购自英文特生物技术(北京)有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒(货号：CD-10793-ML)购自武汉纯度生物科技有限公司；Goat Anti-Rabbit IgG H&L辣根过氧化物酶(HRP)抗体、兔抗Beclin-1抗体(货号：ab6721、ab62557、ab51520)购自Abcam；兔抗微管相关蛋白轻链3(LC3)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)抗体(货号：4108、2118、4228、4257、9272、9271)购自Cell Signaling Technology ......