乔瑞君，郑华月，陈中慧

    神经母细胞瘤(NB)是儿童较为常见的神经系统恶性肿瘤，其发病率在世界范围内呈增长趋势[1]。NB的治疗方法主要有手术和化疗，但治疗效果不佳，严重影响病人身体健康[2]。NB的发生发展与多种基因的异常表达密切相关，探究NB异常表达的基因及其作用机制，可为该疾病的治疗提供新靶点。长链非编码RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA)是两类小分子非编码RNA，均参与调控细胞增殖、分化和凋亡等生命过程，在肿瘤的发生发展中起重要作用[3-4]。研究显示，lncRNA可作为竞争性内源性RNA与miRNA结合，共同影响肿瘤的发生发展[5]。小核仁RNA宿主基因8(SNHG8)是一种lncRNA，参与多种肿瘤发生发展。Song等[6]研究显示，SNHG8在食管鳞癌组织和细胞系中表达明显升高，其高表达与病人的肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及总生存率密切相关，下调SNHG8表达，通过靶向miR-411抑制核转运蛋白α2表达降低食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭，并诱导细胞凋亡。但目前，SNHG8在NB中的表达及其对NB细胞恶性生物学行为的影响和机制尚未明确。Starbase在线生物软件预测显示，SNHG8可能与miR-411-5p靶向结合。研究显示，miR-411-5p在肝细胞癌[7]和乳腺癌[8]等肿瘤组织或细胞系中呈低表达，其过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭及诱导肿瘤细胞凋亡，延缓肿瘤发展进程。但目前，miR-411-5p对NB细胞恶性生物学行为的影响及SNHG8能否靶向调控miR-411-5p影响NB的发展进程还未知。因此，本研究首先检测NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p的表达水平，并以SK-N-SH细胞为研究对象，观察SNHG8能否靶向调控miR-411-5p影响SK-N-SH细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，以期为NB的治疗提供新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 临床资料 选取2017年5月—2019年12月于本院接受治疗的31例NB患儿为研究对象，其中，男17例，女14例；年龄(4.68±1.59)岁；按照国际NB分期系统进行临床分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期10例，Ⅲ期16例。纳入标准：术前未进行放疗、化疗等治疗；术后经病理证实为NB。手术采集患儿癌组织和对应的瘤旁组织，液氮保存。本研究经医院伦理委员会批准同意，病人家属知情同意且自愿签署知情同意书。

    1.2 细胞和试剂 SK-N-SH细胞系购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清(FBS)购自美国Hycolne公司；RPMI 1640培养基、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)蛋白检测试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司；逆转录试剂盒和聚合酶链式反应(PCR)试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司；Trizol试剂和LipofectamineTM 2000试剂盒购自美国Invitrogen公司；PCR引物、SNHG8小干扰RNA(si-SNHG8)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、miR-411-5p模拟物(mimcs)、模拟对照序列(miR-NC)、miR-411-5p抑制剂(anti-miR-411-5p)及抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)均购自上海生工生物工程有限公司；Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体均购自北京中杉金桥生物试剂公司 ......