活血通络方调控Rho/ROCK通路对脑卒中大鼠肢体运动功能恢复的影响
颈髓,脊髓,1材料与方法,2结果,3讨论
张 波,义 艳,王 永,蒋 科脑卒中恢复期多遗留肢体运动功能障碍[1]。积极改善肢体运动功能障碍是脑卒中恢复治疗的重要任务,也是当代神经医学亟待解决的关键问题[2]。脑卒中属中医“中风病”范畴,且中医药在脑卒中康复治疗方面,有其悠久历史[3]。活血通络方以补阳还五汤为基础,并加用息风止痉、温经通络药物组合而成,临床报道发现,其有利于脑卒中后遗症病人肢体、语言、神经等功能恢复[4]。但其促进功能恢复的具体机制还不甚明确。目前,研究发现,脑卒中后遗肢体运动功能恢复,与运动冲动传导、调节有关的传导束-皮质脊髓束神经再生、修复及重塑关系密切[5]。肉瘤同源基因A(RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)通路是神经生长抑制及神经轴突生长溃变的关键通路,且已逐渐成为治疗中枢神经损伤的新靶点[6]。活血通络方能否通过调控RhoA/ROCK通路,调节皮质脊髓束重塑,影响前肢功能恢复的相关报道较少。本研究建立大鼠脑卒中模型,对此进行验证,以期阐明活血通络方改善脑卒中后遗症病人肢体功能恢复的可能机制,并为其开发应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物 清洁健康Wistar雄性大鼠120只,7~8周龄,体质量280~300 g,购自福州海王福药制药有限公司,生产及使用许可证号分别为SCXK(闽)2020-0001及SYXK(闽)2020-0006。本院动物房中常规适应性饲养1周。本实验经本院动物伦理委员会批准同意,符合3R原则。
1.1.2 主要试剂及仪器 活血通络方(延胡索20 g,丹参20 g,木瓜16 g,地风20 g,千年健20 g,鸡血藤20 g,党参15 g,川芎10 g,当归10 g,白芷15 g,红花15 g,桃仁10 g,桑叶15 g,土鳖虫10 g等)中诸药均购自张仲景大药房,将方中诸药加蒸馏水常规煎煮后过滤,取滤液浓缩至含生药浓度为0.868 g/mL的浓缩液备用。生物素化葡聚糖胺(BDA)试剂盒(上海恒斐生物科技有限公司,货号:OR97402);生长相关蛋白(GAP-43)、RhoA、ROCK2、髓鞘相关阻断因子(Nogo-A)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)等抗体均购自美国abcam公司,货号:ab75810、ab187027、ab125025、ab62024、ab277524;Axio Imager 2光学显微镜(北京普瑞赛司仪器有限公司);JS-1070P/Mini化学发光成像仪(上海向帆仪器有限公司)等。
1.2 方法 ......
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