郑 茜，张 勇，杨东伟，王东伟

    心力衰竭以心脏结构或功能损害导致一系列终末期临床综合征为特点，发病率和死亡率均较高[1]。心肌细胞凋亡为心力衰竭心肌病理损伤的重要病理生理机制，目前普遍认为抑制细胞凋亡可改善心脏病理组织变化[2]。microRNAs(miRNAs)是一组由短基因编码、内部转录且天然存在的非编码RNA，可与靶基因mRNA的3′非翻译区(untranslated area，UTR)结合，促进mRNA降解或抑制mRNA翻译，进而调节生理和病理过程[3]。相关研究显示，miR-199a-5p可靶向抑制细胞增殖、迁移与侵袭并诱导凋亡[4-6]。转录因子活化蛋白激酶B(transcription factor activated protein kinase B，JunB)是激活蛋白-1转录因子家族成员，可与位于靶基因顺式调控域中的认知结合序列结合，从而调节细胞周期、增殖和凋亡等多种生物学过程[7]。目前关于miR-199a-5p是否可靶向JunB调节心肌细胞凋亡的报道较少，故本研究通过结扎左冠状动脉前降支诱导构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，探讨抑制miR-199a-5p表达和miR-199a-5p过表达时预测靶基因JunB表达及心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的变化，以期为改善心力衰竭病理损伤提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物和细胞 无特定病原体(SPF)级雄性7周龄Wistar大鼠120只，体质量(200±20)g，由湖北省实验动物研究中心提供，许可证号SCXK(鄂)2015-0018；H9C2心肌细胞系购自南京科佰生物科技有限公司。

    1.1.2 实验试剂和仪器 miR-199a-5p Antagomir、miR-199a-5p Agomir、Antagomir对照及Agomir对照液均购自苏州吉玛基因股份有限公司；双萤光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Abcam公司；2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenylte-trazolium chloride，TTC)染色试剂盒、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色试剂盒购自北京索莱宝生物科技有限公司；兔抗活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-aspartate specific cysteine protease 3，Cleaved-Caspase 3)、JunB、淋巴细胞瘤-2(blymphoma 2，Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein ......