郭 亮，李亚洁

    缺血性心律失常是心肌梗死病人常见的并发症，可减少病人冠状动脉血流量，促进心肌缺血进展，加重心肌损伤，是导致病人猝死的主要原因之一，因此，防治缺血性心律失常对提高冠心病等心血管疾病病人生活质量和存活率具有重要的临床意义[1-2]。炎症参与介导缺血性心律失常的发病过程，并促进其进展，使用抗炎药物可改善心肌缺血引发的心律失常症状[3-4]。miR-146a-5p是一种具有显著抗炎作用的微小RNA，参与介导哮喘、慢性阻塞性肺疾病、心律失常等炎性疾病的发生发展过程，过表达miR-146a通过阻止核转录因子-κB(NF-κB)信号激活抑制炎症[5]，且miR-146a-5p可作为心房颤动的生物标志物，经药物治疗后其血浆水平升高[6]，Notch2是其靶基因。有研究表明，miR-146a-5p可直接靶向下调Notch2表达，进而保护心肌细胞免受缺氧/复氧损伤[7-8]，提示miR-146a-5p/Notch2可作为缺血性心律失常的重要治疗靶点。Hipk1是一种环状RNA，可调控炎症发生及进展，下调Hipk1表达可减少炎性因子表达分泌，抑制炎症，抑制宫颈炎进展[9]，同时促进心肌细胞生长和增殖，改善心肌缺血损伤后不良心脏重塑和心功能障碍[10]，因而推测干扰CircRNA Hipk1可能对缺血性心律失常具有治疗作用。本研究建立缺血性心律失常大鼠模型，探讨CircRNA Hipk1调控miR-146a-5p/Notch2轴对缺血性心律失常大鼠心肌细胞凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 SD大鼠购自辽宁长生生物技术股份有限公司[SCXK(辽)2020-0001]，质量合格证号No.210726200100192861，体质量(200±20)g，无特定病原体(SPF)级，雄性，参照《中华人民共和国实验动物管理条例》于我院实验动物中心饲养，分笼饲养，每笼8只，照明12 h/12 h昼夜节律，食水充足，通风良好，温度20～25 ℃，相对湿度50%～60%。

    1.1.2 实验试剂与仪器 Hipk1、miR-146a-5p、U6、Notch2及GAPDH引物、CircRNA Hipk1 siRNA腺相关病毒、miR-146a-5p Antagomir、CircRNA Hipk1 siRNA阴性对照腺相关病毒、miR-146a-5p Antagomir阴性对照均购自上海吉玛制药技术有限公司；2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染液(D025-1-1)、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测试剂盒(G001-1-1)、苏木精-伊红(HE)染色试剂盒(D006-1-1)、大鼠白细胞介素(IL)-17测试盒(H014-1)、大鼠IL-1β测试盒(H002)、TRIzol总RNA提取试剂(N065)、一步法逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)试剂盒(N123)购自南京建成生物工程研究所有限公司 ......