陈 博,汪玲果,蔺鹏楨

    胶质瘤是最常见的人类中枢神经系统原发恶性肿瘤之一,约占颅内原发肿瘤的65%[1]。近年来,世界范围内胶质瘤的发病率呈现急剧上升的趋势[2]。目前,手术依旧是最主要的治疗方法,其他治疗方法有放疗、化疗和免疫治疗[3-4]。但目前即使手术结合术后放疗、化疗,预后效果仍较差、复发率高[5-6]。因此,需要寻找新的潜在靶点和治疗手段来治疗胶质瘤。

    细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDKL2)位于染色体4q21,根据结构域的氨基酸分析,其结构域与激酶结构域具有一定的相似性,被归类于cdc2相关丝氨酸/苏氨酸激酶亚家族的成员[7]。CDKL2被认为与大脑的行为和神经系统疾病有关[8]。研究发现,CDKL2与某些肿瘤疾病的发生具有一定的相关性,例如前列腺癌、乳腺癌、肝癌以及胶质瘤[9-11]。此外,CDKL2表达降低与胶质瘤的进展及不良预后相关[12]。通过DNA甲基化分析结果表明,胶质瘤呈现异常CDKL2甲基化水平[11]。DNA甲基化是表观遗传修饰方法之一,可将甲基加在DNA分子中。DNA甲基化可以在不改变DNA序列的情况下改变DNA片段的活性。通常情况下,位于基因起始子位置的DNA甲基化会抑制基因的转录。然而,CDKL2甲基化水平与胶质瘤的生长以及临床作用的相关性仍待阐明。因此,本研究通过检测胶质瘤和正常组织中CDKL2的甲基化水平,探讨临床胶质瘤组织中CDKL2的甲基化水平及其和肿瘤生长的关系,评估甲基化抑制剂对胶质瘤生长的作用,并探讨其潜在的临床意义。

    1 材料及方法

    1.1 细胞系及主要试剂 人胶质母细胞瘤细胞A172、人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87、人胶质瘤细胞U251系购自美国模式菌种库(ATCC)。

    选取2015年—2018年陕西省人民医院神经外科进行胶质瘤手术病人的切除组织,其中瘤组织为癌症病人的肿瘤组织,癌旁组织为距离肿瘤区域1～3 cm的组织,正常组织为距离肿瘤区域>5 cm的区域,所有病人均知情同意并签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

    QIAamp DNA FFPE组织试剂盒购自Qiagen公司(美国),甲基化敏感性限制酶Hin6I购自Fermentas公司(美国),SYBR Green qPCR master mix购自Bio-rad公司(美国),PrimeScriptTMRT试剂盒购自Takara公司(中国),蛋白酶抑制剂cocktail购自Roche Applied Science公司(美国),二喹啉甲酸(BCA)试剂盒购自CWBIO公司(中国),CDKL2抗体和β-actin抗体购自Abcam公司(美国),蛋白免疫印迹法(Western Blot)化学发光液购自PierceBioscience公司(美国) ......