蹇 强,李 丹,程 玮,孙 敏

    心肌炎是心脏炎症性疾病,也是扩张型心肌病的前兆,通常以细胞浸润为主要特征,若心肌炎症在急性期未消退,心脏可能由于心肌细胞坏死受到直接损害,肉芽肿性炎症引起的损伤或成纤维细胞的增殖和胶原沉积引起的纤维化,可能导致扩张型心肌病或充血性心力衰竭发生[1-2]。心肌炎病因包括感染性和非感染性,其中病毒感染是心肌炎的常见病因,病毒可能在遗传易感个体中诱发心肌炎,儿童更易患心肌炎,目前,引起病毒性心肌炎的病毒主要包括柯萨奇病毒B、人类免疫缺陷病毒1、流感病毒及甲型和丙型肝炎病毒等[3]。尽管在较多研究中应用了包括皮质类固醇在内的免疫抑制药物治疗病毒性心肌炎,但效果存在争议。

    近年来,越来越多的实验和临床研究为应用细胞移植改善心肌功能的策略提供支持。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有抗凋亡、抗纤维化和促血管生成等作用。人脐带间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,HuMSCs)是从脐带动脉和静脉及内皮下、血管周围区域中分离出来的细胞,较其他干细胞的来源丰富,生物学性状稳定,具有低免疫原性等特点[4-5]。已有研究表明,HuMSCs移植可能通过调节内质网应激、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号传导途径和抑制心肌细胞凋亡减轻急性心肌炎大鼠的心肌损伤和心脏功能障碍[6]。胰岛再生源蛋白Ⅲγ(islet regenerating Ⅲγ,RegⅢγ)是一种免疫炎症调节因子,在多种疾病或受损组织中表达,通过促进细胞增殖和抵抗细胞凋亡,发挥修复组织损伤的功能[7]。本研究通过慢病毒介导RegⅢγ感染HuMSCs,得到RegⅢγ修饰的HuMSCs,观察其对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心肌炎小鼠模型心脏功能及损伤的影响,以期为临床治疗提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 健康无特定病原体(SPF)级雄性BALB/C小鼠40只,4周龄,由西安交通大学实验动物中心提供,饲养于无特定病原体屏障环境,温度为22～24 ℃,相对湿度为(50±5)%,12 h/12 h明暗周期交替。本研究获得我院伦理委员会审批。

    1.2 实验试剂 RegⅢγ重组表达载体(PCDH-CMV-GFP-RegⅢγ)的构建、转染细胞及慢病毒包装过程均由上海捷瑞生物工程有限公司完成。胎牛血清(杭州四季青),DMEM/F12培养液和胰蛋白酶(美国HyClone公司),Trizol试剂盒(美国Thermo公司),Sensi Fast c-DNA 合成试剂盒和SensiFast SYBR Green Hi-ROX试剂盒(英国Bioline公司),酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司),苏木精-伊红(HE)染色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司),免疫组织化学染色试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司),抗体CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、人类白细胞抗原-DR蛋白(HLA-DR)、CD4、CD8及CD68(英国Abcam公司),辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔或山羊抗小鼠(武汉博士德生物工程有限公司) ......