蔡 婷,梁文菲,李莹莹,肖 慧,杨千培,胡爱琳,柳 维,熊 武

    糖尿病是一种由多种病因引起持续慢性高血糖的代谢性疾病,其血管病变与高糖导致的内皮细胞过早衰老和/或内皮祖细胞(endothelial progenitors cells,EPCs)功能失调有关。EPCs是一种骨髓来源的血管干细胞,能分化成内皮细胞,具有修复内皮和促进血管生成的作用[1]。持续高血糖会导致机体EPCs数量减少,同时造成血管生成功能受损,从而推动糖尿病血管并发症的发生发展[2]。据此,恢复体内EPCs的数量和功能,促进损伤内皮细胞的修复和血管新生,是防治糖尿病血管并发症的关键。人参皂苷Rg1是中药人参的主要生物活性成分,有研究表明,人参皂苷Rg1能通过减轻胰岛素抵抗发挥降血糖的作用,可以用于缓解糖尿病及其血管并发症。目前研究证实人参皂苷Rg1能通过促进EPCs增殖发挥促进血管再生的作用[3]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)[4-5]、基质细胞衍生因子-1α(stromal derived factor-1α,SDF-1α)[6]、血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)[7]、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)[8-9]是与血管生成相关的生长因子。然而人参皂苷Rg1对高糖诱导损伤的EPCs生物学功能修复及对分泌VEGF、SDF-1α、Ang-1、MMP-2的影响鲜有报道。故本研究将通过分离人EPCs,探讨人参皂苷Rg1干预下对高糖诱导损伤EPCs生物学功能及分泌VEGF、SDF-1α、Ang-1、MMP-2的影响。

    1 材料与方法

    1.1 药物与试剂 人参皂苷Rg1(纯度≥98%,上海源叶生物科技有限公司,货号:B21057);EGMTM-2MV培养基(美国Lonza公司,货号:CC-3162);青霉素-链霉素双抗溶液(南京凯基生物科技有限公司,货号:KGY002);DMEM/F12培养基、磷酸缓冲盐溶液(PBS)缓冲液(美国Hyclone公司,货号:SH30023.01B、SH30256.01B);胎牛血清(美国GIBCO公司,货号:10270-106);胰酶(美国GIBCO公司,货号:15050-057);乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)购自北京博蕾德生物科技有限公司(浓度:10 mg/L);荆豆凝集素(FITC-UEA-I)购自美国Sigma公司(货号:L-9006);Anti-CD31抗体、山羊抗兔IgG(FITC)(英国Abcam公司,货号:ab28364、ab6717);细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)购自上海碧云天生物技术有限公司(货号:C0037);Matrigel基质凝胶(美国Becton Dickson公司);VEGF、SDF-1α、Ang-1、MMP-2的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司(货号:JL18341、JL13740、JL10166、JL13552) ......