贾子君,周庆兵,张 艳,徐凤芹

    动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病、中风和外周动脉疾病的主要病理基础[1]。动脉粥样硬化严重威胁人民群众的身体健康,也给国家和社会带来了沉重的经济负担[2]。现有研究表明,动脉粥样硬化的病理机制主要包括炎症反应、血脂异常、平滑肌细胞异常增殖等[3]。近年来,随着多组学技术的不断发展,动脉粥样硬化基因甲基化的研究受到众多研究者的关注[4]。DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,是指胞嘧啶添加甲基基团形成5-甲基胞嘧啶,这一过程需要DNA甲基转移酶的介导,并由S-腺苷甲硫氨酸提供甲基供体。DNA甲基化对基因的表达具有重要的调控作用,一般认为启动子区域高甲基化能抑制基因的下游表达,低甲基化能促进基因的表达[5]。现有研究表明,DNA异常甲基化在动脉粥样硬化的发生与发展中扮演重要角色,以动脉粥样硬化异常基因甲基化为靶点的药物开发研究有可能为动脉粥样硬化的治疗带来突破[6]。

    传统中医中并没有动脉粥样硬化这一病名,参照动脉粥样硬化类疾病的常见临床症状表现,可将其归入到中医“脉痹”“胸痹”“中风”等疾病范畴中。近年来,陈可冀院士团队提出了以瘀毒病机为核心的动脉粥样硬化致病理论[7]。徐凤芹教授传承了陈可冀院士瘀毒理论思想,从古典名方越鞠丸中发掘出栀子、川芎两味中药,并在临床中广泛使用该药对治疗动脉粥样硬化类疾病,取得了较好的临床疗效。栀子性味苦寒,归心、肺、三焦经,有泻火除烦、清热凉血解毒之功[8]。川芎辛温无毒,活血行气、祛风止痛[9],《神农本草经》中记载川芎“上行头目,中开郁结,下行血海,旁通络脉,为血中之气药”。前期课题组研究表明,活血解毒药对栀子、川芎能够缩小兔动脉粥样硬化斑块厚度及面积,在DNA甲基化研究方面,高通量测序发现栀子、川芎药对能调节动脉粥样硬化兔异常的基因甲基化水平[10]。本研究则从DNA甲基化及下游基因的表达角度,运用多组学技术,进一步深入阐明栀子、川芎药对治疗动脉粥样硬化的现代生物学机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验药物、试剂及仪器 栀子-川芎冻干粉由中国中医科学院西苑医院制剂室制备,栀子与川芎生药质量比为4∶5;人氧化型低密度脂蛋白(human oxidized-LDL,ox-LDL)购于广东奕源生物科技有限公司(货号:YB-002);Gbico DMEM高糖培养基(货号:C11995500BT);细胞毒性试验(CCK-8)细胞活力检测试剂盒购于日本同仁有限公司(货号:CK04-500);可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒(货号:EM013-96);小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒(货号:EM008-96);小鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒(货号:EM004-96);DNA提取试剂盒DNeasy Blood Tissue Kit(250)(Qiagen, Valencia,CA,USA,货号:166013782);动物总RNA抽提取试剂盒(磁珠法,货号:T02-096);酶联免疫检测仪(美国,BioTek公司);二氧化碳(CO2)培养箱(美国,Thermo公司);GCMS-TQ8040 NX mass spectrograph(SHIMADZU,Origin,Japan) ......